[發(fā)明專(zhuān)利]一種適用于分析復(fù)雜基質(zhì)固體樣品中雌激素及雙酚A的前處理方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110273078.7
• 申請(qǐng)日: 2011-09-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102435681A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史江紅;陳慶彩;吳唯;劉曉薇;張暉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種復(fù)雜基質(zhì)固體樣品中有機(jī)污染物的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及分析活性污泥、沉積物或畜禽糞便中雌激素及雙酚A含量的樣品凈化方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，天然與合成雌激素雌酮(Estrone，E1)、17β-雌二醇(17β-Estradiol，E2)、17α-乙炔基雌二醇(17α-Ethinyl?Estradiol，EE2)，以及類(lèi)雌激素活性物質(zhì)雙酚A(BisphenolA，BPA)作為典型的環(huán)境中內(nèi)分泌干擾物引起了學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。研究調(diào)查結(jié)果顯示，在多數(shù)國(guó)家河流或湖泊中有ng/L濃度水平的雌激素被檢出，而這一濃度范圍可以導(dǎo)致虹鱒魚(yú)產(chǎn)生雌性化作用。雖然，雌激素產(chǎn)生的最終源頭是人類(lèi)和哺乳動(dòng)物。但事實(shí)上，生活污水的集中處理和排放以及規(guī)模化畜禽養(yǎng)殖，是造成河流或土壤環(huán)境中雌激素污染的最重要原因。作為類(lèi)雌激素活性物質(zhì)的雙酚A，是生產(chǎn)聚碳酸酯和環(huán)氧樹(shù)脂等的重要原料，由這些原料制造而成的奶瓶等食具、電子器件的包覆材料、紙水杯、金屬飲料罐的保護(hù)涂層、食品包裝材料等產(chǎn)品中均含有雙酚A。因此，上述產(chǎn)品的生產(chǎn)或使用可以導(dǎo)致雙酚A釋放到環(huán)境中。

由于雌激素及雙酚A在環(huán)境介質(zhì)的濃度低至零點(diǎn)幾ng/L水平，所以，對(duì)于環(huán)境樣品的前處理以及儀器分析的技術(shù)要求就變得更加嚴(yán)格。建立高回收率和低成本的分析檢測(cè)技術(shù)，成為了當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問(wèn)題和進(jìn)一步研究雌激素在環(huán)境介質(zhì)中的濃度分布特征、遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律的瓶頸之處。很多樣品在儀器分析之前沒(méi)有得到很好的凈化和富集，分析時(shí)由于基質(zhì)效應(yīng)抑制或放大了雌激素的信號(hào)強(qiáng)度，使分析方法回收率降低，重現(xiàn)性變差。因此，凈化步驟是樣品分析過(guò)程中的最為關(guān)鍵的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)基質(zhì)復(fù)雜的污泥和沉積物樣品，其前處理技術(shù)難度大等問(wèn)題，擬開(kāi)發(fā)一種回收率高、靈敏度高、準(zhǔn)確而快速的凈化技術(shù)，尤其是實(shí)現(xiàn)較好的除雜效果，減弱基質(zhì)干擾作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品中雌激素及雙酚A的共檢測(cè)定量分析技術(shù)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

圖1描述了一種適用于分析復(fù)雜基質(zhì)固體樣品中雌激素及雙酚A的前處理方法，其特征在于該方法包括如下部分：

(1)固體樣品提取

將采集的污泥和沉積物樣品進(jìn)行冷凍干燥，以丙酮/甲醇＝1∶1(v/v)為萃取劑，用快速溶劑萃取方法提取樣品中的雌激素及雙酚A；然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1ml左右，用氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)糇鲀艋１景l(fā)明所述的快速溶劑萃取方法選擇的溫度為80℃，壓力為1500pis，靜態(tài)提取2次，各8min。

(2)提取液凈化

a.液液萃取(LLE)凈化：用乙腈重新溶解殘?jiān)螅偌尤胝和殇鰷u混合，萃取萃取去除油脂等非極性物質(zhì)，重復(fù)兩次棄去正己烷相，并將乙腈相用氮?dú)獯蹈伞?/p>

b.Florisil凈化：用正己烷/二氯甲烷＝3/1(v/v)溶液重新溶解LLE凈化后的殘?jiān)缓笸ㄟ^(guò)預(yù)先用正己烷活化好的Florisil固相萃取柱，再用正己烷/二氯甲烷＝3/1(v/v)淋洗，以丙酮/二氯甲烷＝2/8(v/v)為洗脫劑經(jīng)行洗脫，洗脫液用氮?dú)獯蹈伞?/p>

c.堿液凈化(AAE)+HLB柱凈化：用0.1M的NaOH溶液超聲溶解Florisil凈化后的殘?jiān)缓笸ㄟ^(guò)0.22μm的尼龍濾頭。濾液與100ml超純水、6ml甲醇混勻后，用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至3左右，并通過(guò)HLB柱富集凈化。將HLB柱用乙酸乙酯洗脫，洗脫液以氮?dú)獯蹈珊蠖ㄈ荩郎y(cè)定。

(3)利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析雌激素及雙酚A濃度

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Agilem?1100高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元輸液泵及自動(dòng)進(jìn)樣器(美國(guó)Agilent公司)；3200QTRAP四極桿-線性阱復(fù)合型串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子化源(ESI)以及Analyst?1.4.1數(shù)據(jù)處理軟件(美國(guó)Applied?Biosystem公司)。

色譜柱：Nova-Pak?C18(3.9mm×150mm×4μm)，Waters公司。離子源：電噴霧離子化源(ESI)，負(fù)離子方式檢測(cè)；離子噴射電壓：-4500V；溫度：450℃；源內(nèi)氣體1(GS1，N₂)壓力：45psi；源內(nèi)氣體2(GS2，N₂)壓力：45psi；氣簾氣體(N₂)壓力：20psi；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；碰撞氣(N₂)壓力：Medium。HPLC流動(dòng)相梯度洗脫條件詳見(jiàn)表1。

表1?雌激素及BPA的梯度洗脫條件

(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，以外標(biāo)法進(jìn)行定量測(cè)定