[發明專利]一種薄殼山核桃組織培養繁殖方法

無效

• 申請號: 201110272322.8
• 申請日: 2011-09-15
• 公開（公告）號: CN102388806A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 董筱昀;蔣澤平;黃利斌;竇全琴;張敏;蔣春
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種薄殼山核桃組織培養繁殖方法，包括以下步驟：

(1)選材及消毒處理：采用由薄殼山核桃種子繁育的優良實生幼苗為接種材料，取離根部10厘米以上的莖段為外植體，然后將選取的外植體剪切成3-4cm左右長的小段，經70％酒精消毒30秒，再用濃度為0.1％的升汞溶液消毒6～8分鐘，最后用無菌水沖洗3～5次；

(2)試管芽苗培養：在超凈的工作臺上及無菌條件下，將步驟(1)中消毒后的外植體剪去接觸消毒液的傷口，留1～2cm帶芽莖段接種在經消毒的含有啟動培養基的玻璃培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，其中光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為14小時，溫度為25～28℃，濕度為50％～65％，培養25天，分化長成試管芽苗；

(3)增殖培養：將從步驟(2)中長成的試管芽苗，剪切帶有1-2個腋芽的節段或頂芽后，在超凈的工作臺上及無菌條件下，轉接于經消毒的含有增殖培養基的玻璃培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為14小時，溫度為25～28℃，濕度為50％～65％的條件下，對芽苗進行增殖培養，增殖系數為3.25～3.98，使其不斷增殖，直至達到所需要的繁殖生產規模；

(4)壯苗培養：將步驟(3)中增殖后的試管芽苗，剪切帶有1-2個腋芽的節段或頂芽后，在超凈的工作臺上及無菌條件下，接種于經消毒的含有壯苗培養基的玻璃培養瓶中，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為14小時，溫度為25～28℃，濕度為50％～65％的條件下，進行壯苗培養，25天后進入下一步驟；

(5)生根培養：將步驟(4)中經過壯苗培養后的試管壯苗，去掉基部組織和部分葉片，留3～4片葉片，在超凈的工作臺上及無菌條件下，接種于經消毒的含有生根處理產生根原基培養基的玻璃培養瓶中，在光照強度為1000～1500lx，每日光照時間為14小時，溫度為25～28℃，濕度為50％～65％的條件下，進行生根培養8～15天，生根率在90％～95％；

(6)移栽、成活：將步驟(5)中經生根培養的帶有直根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黃心土的基質中，其中泥炭與黃心土的體積比為1∶1，然后澆透水，保持溫度25～30℃，相對濕度85％以上，先閉光培養10天，后逐漸見光，在培養40～45天后，進行全光照，移栽成活率在70～80％；

所述的啟動培養基為：每升基本培養基+3.0～4.0mg?6-芐基嘌呤+0.01～0.05mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的增殖培養基為：每升基本培養基+2.0～3.0mg?6-芐基嘌呤+0.05～0.1mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的壯苗培養基為：每升基本培養基+3.5～4.5mg?6-芐基嘌呤+0.08～0.2mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；

所述的生根處理產生根原基培養基為：每升基本培養基+0.2～0.5mgα-萘乙酸+0.3～0.6mg吲哚丁酸+2000～3000mg活性炭。

2.根據權利要求1所述的一種薄殼山核桃組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的基本培養基包括常量元素、微量元素、鐵鹽和有機成分。

3.根據權利要求2所述的一種薄殼山核桃組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的常量元素的組分和其對應的濃度如下：

硝酸鉀???????????950～1900mg/L；

硝酸銨???????????825～1650mg/L；

磷酸二氫鉀???????85～170mg/L；

硫酸鎂???????????185～370mg/L；

氯化鈣???????????165～330mg/L。

4.根據權利要求2所述的一種薄殼山核桃組織培養繁殖方法，其特征在于，所述的微量元素的組分和其對應的濃度如下：

碘化鉀????????????0.83mg/L；

硼酸??????????????6.2mg/L；

硫酸錳????????????22.3mg/L；

硫酸鋅????????????8.6mg/L；

鉬酸鈉????????????0.25mg/L；

硫酸銅????????????0.025mg/L；

氯化鈷????????????0.025mg/L。