[發明專利]一種養血清腦顆粒的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201110269069.0
• 申請日: 2011-09-13
• 公開（公告）號: CN102998410A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 孫玉俠;高展;劉彥莉;曹鳳蘭
• 申請（專利權）人: 天士力制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/88
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

1.一種養血清腦顆粒的質量檢測方法，其特征在于，包括對以下成分的鑒別：

A夏枯草中熊果酸鑒別

B延胡索鑒別

C決明子鑒別

D當歸和川芎鑒別

E夏枯草中迷迭香酸鑒別

F川芎中生物堿鑒別

G川芎中歐當歸內酯A鑒別

H雞血藤鑒別

I白芍鑒別

J熟地黃鑒別

K鉤藤鑒別。

2.根據權利要求1的質量檢測方法，其特征在于，鑒別方法采用薄層色譜法。

3.根據權利要求1的質量檢測方法，其特征在于，還包括對養血清腦顆粒中的有效成分芍藥苷進行含量測定，含量測定方法采用高效液相色譜法。

4.根據權利要求1的質量檢測方法，其特征在于，使用其中一項作為對養血清腦顆粒的鑒別方法，或多項組合使用作為對養血清腦顆粒的鑒別方法。

5.根據權利要求4的質量檢測方法，其特征在于，是11項鑒別方法組合使用。

6.根據權利要求5的質量檢測方法，其特征在于，是11項鑒別方法組合使用，同時對養血清腦顆粒中的有效成分芍藥苷進行含量測定。

7.根據權利要求1的質量檢測方法，其特征在于，所述夏枯草中熊果酸鑒別，步驟如下：

取本品0.5-2.0g，加稀鹽酸0.2-1.0ml和乙醚10-30ml，加熱回流20-40分鐘，提取液揮盡乙醚，殘渣加甲醇0.5-2.0ml使溶解，作為供試品溶液，另取熊果酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.1-1.0mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5-15μl、對照品溶液1-10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯-氯仿-冰醋酸(15-25∶2-4∶5-9∶0.1-0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5-15％硫酸乙醇溶液，在100-120℃加熱至顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述延胡索鑒別，步驟如下：

取本品0.5-1.5g，置具塞離心管中，加0.1-0.5mol/L氫氧化鈉溶液2-6ml，振搖使溶解，加醋酸乙酯5-10ml，充分振搖，離心2-5分鐘，取上層溶液，蒸干，殘渣加甲醇1-2ml使溶解，作為供試品溶液，另取延胡索對照藥材0.5-2.0g，加氨溶液0.5-2.0ml，研磨，加二氯甲烷5-20ml，溫浸1-3小時，濾過，濾液濃縮至約0.5-2.0ml，作為對照藥材溶液，再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含0.1-1.0mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5-15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-氯仿-甲醇-濃氨試液(5-20∶6-10∶1-3∶0.2-0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述決明子鑒別，步驟如下：

取決明子對照藥材0.5-1.5g，加稀鹽酸0.5-1.0ml、乙醚10-20ml，水浴回流0.5-2.0小時，取出，放冷，濾過，濾液回收乙醚至干，殘渣分別加甲醇0.5-2.0ml使溶解，作為決明子對照藥材溶液，再取大黃素甲醚、大黃酚、大黃素和橙黃決明素對照品，加無水乙醇-乙酸乙酯(1-4∶0.5-2)制成每1ml各含0.5-1.0mg的溶液，作為混合對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取“夏枯草中熊果酸”鑒別項下供試品溶液10-20μl，對照藥材溶液7-15μl及混合對照品溶液2-4μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-環己烷-乙酸乙酯-甲酸(3-9∶10-14∶3-7∶0.2-0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，置于氨蒸氣中熏10min以上，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述當歸和川芎鑒別，步驟如下：

分別取當歸、川芎對照藥材各0.5-2.0g，加乙醚10-30ml，水浴回流0.5-2.0小時，取出，放冷，濾過，濾液回收乙醚至干，殘渣分別加乙酸乙酯0.5-2.0ml、1.0-2.0ml使溶解，作為當歸、川芎對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取“夏枯草中熊果酸”鑒別項下供試品溶液5-12μl，當歸對照藥材溶液5-15μl和川芎對照藥材溶液2-8μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(5-9∶0.5-1.5∶0.2-0.8)為展開劑，展開8cm以上，取出，晾干，置于紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

所述夏枯草中迷迭香酸鑒別，步驟如下：

取迷迭香酸對照品，加稀乙醇制成每1ml含0.5-1.0mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取“夏枯草中熊果酸”鑒別項下供試品溶液1-5μl、對照品溶液1-4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(1-3∶5-6∶0.2-0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

所述川芎中生物堿鑒別，步驟如下：

取本品5-20g，加入氨水3-8ml，及乙醚30-50ml，密塞靜置30-90分鐘，玻璃棒攪勻，水浴回流20-40分鐘，取出，放冷，提取液回收乙醚至干，殘渣加無水乙醇0.5-2.0ml使溶解，作為供試品溶液，取川芎對照藥材0.5-2.0g，加氨水3-8ml，及乙醚10-30ml，密塞靜置50-70分鐘，水浴回流20-40分鐘，取出，放冷，濾過，濾液回收乙醚至干，殘渣加無水乙醇0.5-2.0ml使溶解，作為川芎對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取川芎對照藥材溶液7-10μl、供試品溶液7-12μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(7-11∶0.5-2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀溶液-碘碘化鉀溶液(1-4∶0.5-1)混合溶液，置于日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述川芎中歐當歸內酯A鑒別，步驟如下：

取本品2-10g，加入乙醚20-60ml，水浴回流20-60分鐘，取出，放冷，提取液回收乙醚至干，殘渣加甲醇0.5-2.0ml使溶解，作為供試品溶液，另取歐當歸內酯A對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.2-1.0mg的溶液，作為歐當歸內酯A對照品溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取歐當歸內酯A對照品溶液2-6μl、供試品溶液6-10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(1-5∶0.5-2)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

所述雞血藤鑒別，步驟如下：

取本品5-20g，加入0.1-0.5％氫氧化鈉溶液20-50ml，搖勻，超聲處理20-40min，取出，離心，取上清液，用石油醚(60～90℃)萃取1-3次，每次10-20ml，棄去石油醚層，取水層加0.3-0.6ml稀鹽酸，搖勻，用乙醚萃取1-3次，每次10-20ml，合并乙醚萃取層，回收乙醚至干，殘渣加甲醇0.5-2.0ml溶解，加入硅膠1-2g拌勻，揮干溶劑，置硅膠柱上，用甲醇-三氯甲烷(0.5-1.5∶7-11)30-50ml洗脫，收集甲醇-三氯甲烷(0.5-1.5∶7-11)洗脫液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液，另取芒柄花素適量，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取芒柄花素對照品溶液2-5μl、供試品溶液5-10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10-40∶1)為展開劑，展開8cm以上，取出，晾干，置于紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

所述白芍鑒別，步驟如下：

照薄層色譜法試驗，分別吸取含量測定項中供試品溶液20-30μl及芍藥苷對照品溶液10-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20-50∶3-7∶5-15∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3-5％香草醛硫酸溶液，在100-120℃加熱至顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述熟地黃鑒別，步驟如下：

取本品15-20g，加水50-100ml，于50-60℃溫熱20-50分鐘，取出，超聲處理20-40分鐘，離心，取上清液，用乙酸乙酯萃取1-3次，每次20-40ml，合并乙酸乙酯，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加乙酸乙酯3-10ml使溶解，加入中性氧化鋁2-4g，拌勻，裝入中性氧化鋁柱，用乙醇20-50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇0.5-2.0ml，使溶解，作為供試品溶液，另取熟地黃對照藥材2-5g，加水30-80ml煎煮0.5-2.0小時，濾過，濾液用乙酸乙酯萃取1-3次，每次20-40ml，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-2.0ml，使溶解，作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，分別吸取供試品溶液20-25μl及對照藥材溶液10-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(0.5-2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2，4-二硝基苯肼乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述鉤藤鑒別，步驟如下：

取本品5-20g，加濃氨試液5-15ml使浸潤，密塞20-40分鐘，加入乙醚50-100ml，加熱回流0.5-2.0小時，放冷，分取乙醚層，用3-8％鹽酸溶液振搖提取1-3次，每次10-30ml，合并3-8％鹽酸溶液，用氨水調節pH值至9，用乙醚振搖提取1-3次，每次10-30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-2.0ml使溶解，作為供試品溶液，另取鉤藤對照藥材1-3g，加濃氨試液2-5ml浸潤，密塞20-40分鐘，加乙醚20-50ml，加熱回流0.5-2.0小時，放冷，濾過，濾液蒸干，加甲醇0.5-2.0ml使溶解，作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(6-10∶10-14∶1-3∶1-3∶0.5-0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，改良碘化鉍鉀溶液-碘碘化鉀溶液(1-4∶0.5-1)混合溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的主斑點。