[發明專利]一體化緩沖液及使用該一體化緩沖液分離核酸的方法

無效

• 申請號: 201110267880.5
• 申請日: 2011-09-09
• 公開（公告）號: CN102533725A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 周永剛;譚文斌
• 申請（專利權）人: 上海佑科生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H21/00;C07H1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種一體化緩沖液，可用于不同目的的核酸分離，其特征在于，其包括：離液試劑、非離液試劑以及硅膠膜柱。

2.根據權利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述離液試劑包括異硫氰酸胍，所述硫氰酸胍的終濃度為2.0M至2.5M。

3.根據權利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述非離液試劑包括氯化鈉和/或鉀醋酸，所述氯化鈉濃度為130mM至140mM；醋酸鉀濃度為0.3M。

4.根據權利要求3所述的一體化緩沖液，其特征在于：所述非離液試劑鹽濃度約為0.43～0.44mM。

5.根據權利要求1所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述硅膠膜柱為佑科純化柱。

6.根據權利要求5所述的一體化緩沖液，其特征在于，所述佑科純化柱中硅膠膜填充厚度為2毫米或/和0.5毫米。

7.根據權利要求1所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，可用于不同目的的核酸分離，包括質粒脫氧核糖核酸的提取，脫氧核糖核酸凝膠回收和脫氧核糖核酸純化，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將一體化緩沖液加入到包含核酸的溶液中，并使成分達到最后的最佳濃度；

(2)在一體化緩沖液中的核酸會結合在硅膠膜柱的硅膠基質上；

(3)清洗核酸中的內毒素和其他雜質成分；

(4)將核酸從固相硅膠基質上洗脫下來。

8.根據權利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于，所述質粒脫氧核糖核酸的提取，主要包括如下步驟：

第一，裂解細胞壁，質粒脫氧核糖核酸被釋放但被變性；

第二，變性的質粒脫氧核糖核酸在加入1-4倍一體化緩沖液后恢復超螺旋結構從而溶于水；

第三，細胞裂解液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結合而其他成分將穿過硅膠膜；

第四，結合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去內毒素和其它雜質后被洗脫。

9.根據權利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于，所述脫氧核糖核酸凝膠回收，主要包括如下步驟：

第一，脫氧核糖核酸片段從瓊脂糖凝膠中切除，加入3-5倍凝膠體積的一體化緩沖液；

第二，50-55度孵育10-30分鐘以完全溶解瓊脂糖凝膠；

第三，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結合而其他成分將穿過硅膠膜；

第四，結合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質后被洗脫。

10.根據權利要求7所述的使用該一體化緩沖液分離核酸的方法，其特征在于：所述溶液中脫氧核糖核酸的純化，主要包括如下步驟：

第一，加入3-5倍溶液體積的一體化緩沖液，

第二，將所有溶液穿過硅膠膜，脫氧核糖核酸將與之結合而其他成分將穿過硅膠膜；

第三，結合在硅膠膜上的脫氧核糖核酸洗滌除去其它雜質后被洗脫。