[發(fā)明專利]β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因及其表達(dá)產(chǎn)物和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110266089.2
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102321646A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邢苗;劉士德;張建華;李小青;田生禮;歐陽秋玲
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N9/42;C12P19/14
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

1.一種β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因，其特征在于，包括如下序列：

(a)、編碼由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(b)、和編碼由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(c)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多肽由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成，其中一個或多個氨基酸被缺失、替代或增加，且所述多肽具有β-葡聚糖內(nèi)切酶活性；或

(d)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多肽與由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少98％的同源性。

2.一種β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因，其特征在于，包括如下序列：

(a)、由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；

(b)、和編碼由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸具有至少98％同源性的多核苷酸，或者所述多核苷酸的互補鏈；或

(c)、編碼多肽的多核苷酸或所述多核苷酸的互補鏈，所述多核苷酸序列由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成，其中一個或多個密碼子被缺失、替代或增加，所述多肽具有β-葡聚糖內(nèi)切酶活性。

3.如權(quán)利要求2所述的β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因，其特征在于，所述β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因包括由SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列組成的多核苷酸。

4.一種基因表達(dá)載體，其特征在于，包括如權(quán)利要求1或2所述的β-葡聚糖內(nèi)切酶PEGase-2基因。

5.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，包括如權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)載體，所述宿主細(xì)胞為真核生物細(xì)胞。

6.如權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述真核生物細(xì)胞為酵母細(xì)胞或里氏木霉細(xì)胞。

7.一種蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、提供如權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞，誘導(dǎo)表達(dá)得到表達(dá)液；

步驟二、利用40％和70％的飽和硫酸銨將所述表達(dá)液分級沉淀，分離粗產(chǎn)物；

步驟三、利用HiTrap^TM?Capto^TM?Q離子交換層析膠純化粗產(chǎn)物，得到所述蛋白質(zhì)。

8.一種蛋白質(zhì)，其特征在于，包括如下序列：

(a)、由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽；

(b)、和由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少98％同源性的多肽；或

(c)、由SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列組成的多肽，其中一個或多個氨基酸被缺失、替代或增加，且所述多肽具有β-葡聚糖內(nèi)切酶活性。

9.一種酶制劑，其特征在于，包括如權(quán)利要求8所述的蛋白質(zhì)；所述酶制劑用于水解β-1，3(4)-葡聚糖。

10.如權(quán)利要求9所述的酶制劑，其特征在于，所述酶制劑還包括用于提高酶活性的金屬陽離子。