[發明專利]一種測定脂質體藥物包封率的方法

有效

• 申請號: 201110263566.X
• 申請日: 2011-09-07
• 公開（公告）號: CN102980963A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 劉紅星;張揚;張波;趙焰平;張偉強;魏祥
• 申請（專利權）人: 北京泰德制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;李渤

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，具體涉及一種測定脂質體藥物包封率的方法。

背景技術

脂質體藥物指的是藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的微型泡囊，具有優良的生物相容性，對組織、細胞具有一定的靶向性，可激活機體自身的免疫功能，提高藥物的溶解度，改變藥物在體內的分布，延緩藥物的釋放，從而起到提高藥物治療指數，降低藥物毒副作用。

脂質體藥物的包封率是包封于脂質體中的藥物量占脂質體系中藥物總量的百分比，是評價脂質體制劑質量好壞的最重要的指標之一。脂質體粒徑大小和分布均勻程度也與其密切有關，直接影響脂質體在集體組織的行為和處置，是脂質體能否發揮較普通制劑高效、低毒的關鍵。因此，研究脂質體時，包封率是一個重要的考察項目。

包封率的測定方法一般是先用一定的方法把未包封的游離藥物與脂質體分離開并分別進行測定，根據總投藥量計算得出，或分離后測定包封于脂質體內的藥物量與磷脂的比例，計算出藥脂比。常用的測定方法包括葡聚糖凝膠柱過濾法(分子篩法)、超濾膜過濾法、超速離心法、微型柱離心法和透析法等。

透析法是把藥物放入具有一定截留分子量的透析袋中，再把透析袋置于比它體積大許多倍的透析介質中，游離藥物順濃度梯度從透析袋內滲透到透析袋外，而脂質體由于粒徑較大而不能滲透到外部介質里。然后在不同的時間測定介質中的藥物濃度，直至外部介質中的藥物濃度不變，則說明透析袋內外游離藥物的濃度相同，達到平衡。此時的時間作為游離藥物透支平衡時間，測出此時介質中的藥物濃度計算游離藥物的濃度，進而計算出包封率。該方法中所用的透析袋價格比較便宜，且用量較少，因此可降低使用成本，但是對藥物的溶解度要求極為苛刻，對于難溶性藥物不適用，且耗時長，一般需5-24h，頻繁更換溶劑容易產生人為誤差，外部介質對脂質體周圍的游離藥物稀釋倍數較大，可能破壞脂質體與游離藥物的動態平衡，使得包在脂質體中的藥物滲漏出來，透析過程中由于脂質體的不穩定性也可能產生滲漏。為此，在中國專利申請CN101017164中公開了先在脂質體混懸液中加入與脂質雙分子層不發生相互作用的水溶性物質如5-氟尿嘧啶或酚紅再進行透析的改進方法，雖然在一定程度上可以緩解脂質體中藥物的滲漏，但是并不能解決透析法中的共性問題，如要求藥物具有一定的溶解度，透析袋對藥物及添加物質的吸附，操作復雜，容易產生人為誤差等。

葡聚糖凝膠柱過濾法是利用分子大小差別進行脂質體與游離藥物分離的方法，但是該方法耗時長，人工裝柱誤差大導致相同樣品的測定重復性差，周圍環境的改變也會對結果的一致性產生影響，不適于分離大分子和粘稠體系，并且易造成堵柱、浪費填料等，增加了分析時間和使用成本。此外，由于葡聚糖凝膠柱法在分離脂質體與游離藥物時洗脫液對脂質體進行了大量的稀釋，可能導致脂質體的滲漏，從而使測定的包封率不準確。針對上述缺陷，在中國專利CN100451646C中提出先通過離心去除葡聚糖微柱中的水，再將樣品加入微柱的頂部、離心，分離出脂質體，再用洗脫液多次離心洗脫分離出游離的藥物。該方法的優點是在最初的離心中已除去增加脂質體體積的過量空白溶液，因此不經稀釋即可重新得到脂質體，但是該法是建立在脂質體不被填充物物理滯留的假設之上，因此同樣不能真實準確地反映出脂質體制劑中實際的包封情況。此外，該方法難以證明在所述離心條件下被包封脂質體與未包封游離藥物已得到充分且完全的分離，即所測包封率結果可能高于或低于實際真實結果。

利用重力差的離心分離法和離心超濾法雖然可在一定程度上縮短測定時間，但是其不能對脂質體與外水相進行準確地分離，前者分離出來的外水相很可能有小單室脂質體存在，導致測得的外水相濃度偏高，這將影響了測定結果的穩定性，而且巨大的離心力會對藥物結構產生破壞，增加了測定誤差。

因此，還有待開發出新的測定脂質體藥物包封率的方法。

發明內容

因此，為了克服了脂質體包封率測定中普遍存在的對藥物選擇性高、無法驗證的缺陷，本發明的目的是提供一種測定脂質體藥物包封率的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的。本發明提供一種測定脂質體藥物包封率的方法，所述方法采用高效液相色譜與分子排阻色譜相結合來測定脂質體的包封率。