[發(fā)明專利]陽(yáng)離子脂質(zhì)體及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110261016.4
• 申請(qǐng)日: 2011-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN102973506A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬軼凡;莊燕;蔡林濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): A61K9/127
• 分類號(hào): A61K9/127;A61K39/39;A61K47/34
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及免疫治療領(lǐng)域，尤其涉及一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體及其制備方法。

【背景技術(shù)】

疫苗是預(yù)防和控制傳染性疾病發(fā)生發(fā)展的重要手段。免疫佐劑(又稱非特異性免疫增生劑)則是疫苗中不可或缺的組成成分，能夠有效地促進(jìn)疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)。隨著疫苗研究的飛速發(fā)展，新型的基因工程疫苗正逐步取代傳統(tǒng)的減毒活疫苗和滅活疫苗。與傳統(tǒng)的疫苗相比，基因工程疫苗具有純度高、特異性強(qiáng)、安全性好等優(yōu)點(diǎn)，然而由于其免疫原性普遍較差，迫切需要結(jié)合有效的免疫佐劑，從而提高疫苗的免疫效力。

脂質(zhì)體納米顆粒是由磷脂雙層殼包裹水相核心形成的球形的實(shí)體，其結(jié)構(gòu)類似生物膜，是一種生物相容性好且無(wú)毒的納米材料。它可包封水溶性和脂溶性藥物，具有減少藥物劑量、緩釋、及靶向性釋放藥物等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛用于納米抗腫瘤藥物的開發(fā)。此外，納米脂質(zhì)體也是一種優(yōu)良的抗原載體，不僅能夠包裹一系列理化性質(zhì)不同的抗原及免疫佐劑，保護(hù)蛋白多肽抗原不被降解，還可以促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的吞噬及呈遞，提高機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)。基于以上這些優(yōu)點(diǎn)，脂質(zhì)體納米顆粒作為一種新型的疫苗載體，正逐漸用于細(xì)菌疫苗、病毒疫苗、抗寄生蟲疫苗以及抗腫瘤疫苗等研制開發(fā)。中性脂質(zhì)體和表面攜帶正電荷的陽(yáng)離子脂質(zhì)體是最常用的納米疫苗載體。其中特別值得關(guān)注的是陽(yáng)離子脂質(zhì)體，它不但是優(yōu)良的蛋白/多肽抗原載體，還是一種新型的免疫佐劑，可直接活化抗原呈遞細(xì)胞，增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。目前，陽(yáng)離子脂質(zhì)體已被GSK公司用于新一代流感疫苗。

以樹突狀細(xì)胞(dendritic?cell，DC)為代表的抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting?cells，APCs)在免疫反應(yīng)中占據(jù)核心地位。其主要作用是識(shí)別、攝取和呈遞抗原，繼而引發(fā)淋巴細(xì)胞活化和特異性體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答。APCs表面廣泛表達(dá)C型凝集素類受體，如甘露糖受體(mannose?receptor，MR)、DEC205/gp200-MR6等。這些受體直接參與了抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別、攝取和呈遞過(guò)程。在抗原和疫苗表面修飾C型凝集素類受體的特異性配體，如甘露糖和甘露聚糖，可促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的攝取，增強(qiáng)疫苗的免疫效力。Copland(Copland.M.J.，Baird，M.A.，Rades，T.，McKenzie，J.L.，Becker，B.，Reck，F(xiàn).，Tyler，P.C.and?Davies，N.M.(2003)Liposomal?delivery?of?antigen?to?human?dendritic?cells.Vaccine?21，883-90.)等在中性脂質(zhì)體中摻入末端修飾有甘露三糖的二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(trimannose-dipalmitoyl?phosphatidylethanolamine，man3-DPPE)，從而使脂質(zhì)體表面攜帶甘露糖殘基。結(jié)果表明man3-DPPE修飾的脂質(zhì)體不但提高DC對(duì)抗原的攝取，而且顯著增強(qiáng)DC誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖。Kojima等(Kojima，N.，Biao，L.，Nakayama，T.，Ishii，M，Ikehara，Y.and?Tsujimura，K.(2008)Oligomannose-coated?liposomes?as?a?therapeutic?antigen-delivery?and?an?adjuvant?vehicle?for?induction?of?in?vivo?tumor?immunity.J?Control?Release?129，26-32.)則發(fā)現(xiàn)，man3-DPPE修飾可促進(jìn)脂質(zhì)體腫瘤疫苗在外周淋巴結(jié)內(nèi)的集聚，并顯著增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫。

目前的研究主要通過(guò)化學(xué)鍵合的方法將甘露糖或寡甘露糖直接修飾到脂質(zhì)體的磷脂分子上，使得脂質(zhì)體表面攜帶甘露糖分子，從而提高其抗原呈遞細(xì)胞靶向性。然而，事實(shí)上由于顆粒大小、電荷、及表面性質(zhì)等理化因素的影響，脂質(zhì)體疫苗在注射入體內(nèi)后絕大部分滯留于注射位點(diǎn)，不能有效地進(jìn)入淋巴器官，降低了脂質(zhì)體疫苗的免疫效力。

【發(fā)明內(nèi)容】

基于此，有必要提供一種能夠提高脂質(zhì)體疫苗免疫效力的陽(yáng)離子脂質(zhì)體及其制備方法。

一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體，包括陽(yáng)離子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述陽(yáng)離子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子組成球殼狀的磷脂雙分子層；所述甘露糖或甘露寡糖連接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修飾的聚乙二醇衍生化磷脂。

優(yōu)選的，所述陽(yáng)離子脂與所述中性磷脂的摩爾比為1∶19～99∶1。