[發(fā)明專利]FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白的表達(dá)和純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110259079.6
• 申請日: 2011-09-02
• 公開（公告）號: CN102978210A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周寧新
• 申請（專利權(quán)）人: 周寧新
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N15/11;C12N1/21;C07K14/47;C07K1/22
• 代理公司: 北京北新智誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11100
• 代理人: 王淳

1.一種FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白的表達(dá)和純化的方法，其特征在于，步驟如下：

a.采用核苷酸序列如SEQ?ID?No：2和SEQ?ID?No：3所示的引物對，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增FXYD6胞內(nèi)區(qū)基因；

b.將擴(kuò)增出的FXYD6胞內(nèi)區(qū)基因插入到已用BamH?I和Xho?I雙酶切后的表達(dá)載體pGEX-6P-1中，構(gòu)建重組載體pGEX-6P-1-FXYD6胞內(nèi)區(qū)；

c.將重組載體pGEX-6P-1-FXYD6胞內(nèi)區(qū)轉(zhuǎn)化于宿主細(xì)胞中，并在宿主細(xì)胞中表達(dá)FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白；

d.表達(dá)的FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白采用蛋白質(zhì)免疫印記進(jìn)行鑒定，之后通過親和層析柱進(jìn)行純化，經(jīng)過純化的蛋白再通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分析鑒定純度。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌。

4.一對用于FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白的表達(dá)和純化的引物，其特征在于，上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No：2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No：3所示。

5.一種可在宿主細(xì)胞中表達(dá)FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白的重組載體，其特征在于，其是采用核苷酸序列如SEQ?ID?No：2和SEQ?ID?No：3所示的引物對、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增FXYD6胞內(nèi)區(qū)基因后，將擴(kuò)增出的FXYD6胞內(nèi)區(qū)基因插入到已用BamH?I和Xho?I雙酶切后的表達(dá)載體pGEX-6P-1中，所得到的重組載體。

6.一種可在宿主細(xì)胞中表達(dá)FXYD6胞內(nèi)區(qū)蛋白的重組載體，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?No：4所示。

7.一種含有權(quán)利要求5或6所述的重組載體的宿主細(xì)胞。

8.如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。

9.如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌。