[發明專利]FXYD6胞內區蛋白的表達和純化方法

無效

• 申請號: 201110259079.6
• 申請日: 2011-09-02
• 公開（公告）號: CN102978210A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 周寧新
• 申請（專利權）人: 周寧新
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N15/11;C12N1/21;C07K14/47;C07K1/22
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司 11100
• 代理人: 王淳

1.一種FXYD6胞內區蛋白的表達和純化的方法，其特征在于，步驟如下：

a.采用核苷酸序列如SEQ?ID?No：2和SEQ?ID?No：3所示的引物對，利用PCR技術擴增FXYD6胞內區基因；

b.將擴增出的FXYD6胞內區基因插入到已用BamH?I和Xho?I雙酶切后的表達載體pGEX-6P-1中，構建重組載體pGEX-6P-1-FXYD6胞內區；

c.將重組載體pGEX-6P-1-FXYD6胞內區轉化于宿主細胞中，并在宿主細胞中表達FXYD6胞內區蛋白；

d.表達的FXYD6胞內區蛋白采用蛋白質免疫印記進行鑒定，之后通過親和層析柱進行純化，經過純化的蛋白再通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分析鑒定純度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為原核細胞。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為大腸桿菌。

4.一對用于FXYD6胞內區蛋白的表達和純化的引物，其特征在于，上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No：2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No：3所示。

5.一種可在宿主細胞中表達FXYD6胞內區蛋白的重組載體，其特征在于，其是采用核苷酸序列如SEQ?ID?No：2和SEQ?ID?No：3所示的引物對、利用PCR技術擴增FXYD6胞內區基因后，將擴增出的FXYD6胞內區基因插入到已用BamH?I和Xho?I雙酶切后的表達載體pGEX-6P-1中，所得到的重組載體。

6.一種可在宿主細胞中表達FXYD6胞內區蛋白的重組載體，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?No：4所示。

7.一種含有權利要求5或6所述的重組載體的宿主細胞。

8.如權利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為原核細胞。

9.如權利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為大腸桿菌。