[發明專利]薩能羊早期胚胎性別鑒定方法

無效

• 申請號: 201110256674.4
• 申請日: 2011-09-01
• 公開（公告）號: CN102304582A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 賈銀海;蘇雷
• 申請（專利權）人: 云南中科胚胎工程生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明提供一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，屬于胚胎工程技術領域。?

背景技術：

人們對哺乳動物性別的決定及控制進行了長期的研究和探索，并由理論逐步走向了實踐應用。性別鑒定對于哺乳動物發育生物學，生殖生物學，進化生物學，遺傳學和瀕危物種的保存是相當重要的。目前研究顯示哺乳動物性別控制主要體現在對牛的性別鑒定上，在羊上報道的相對較少，而且是以體內生產性控胚胎為主，體內生產性控胚胎主要是通過應用流式細胞儀對精子進行分離和分子生物學方法-PCR擴增法來生產性控胚胎。從目前X、Y精子分離技術的發展來看，雖然使用流式細胞分類儀已成功分離了X、Y精子，但其成本高，分離效率低，一時還很難在生產中應用推廣。但PCR法還存在著準確性不高、方法不夠成熟，取樣過程造成胚胎損傷，使妊娠率和產羔率下降等問題，因此進行早期性別鑒定就顯得非常重要。采用分子生物學方法對薩能羊進行性別鑒定，對其他哺乳動物的胚胎性別鑒定提供可靠的依據，對人類和動物尤其是家畜的育種和生產有著深遠的意義。?

國內外進行胚胎性別鑒定的研究已經有很多報道，運用的分子生物學方法有很多種，如常規PCR方法、巢式PCR方法、復合PCR方法等，但運用HOT-Start?PCR方法還鮮有報道。?

發明人將本發明的方法在數據庫進行搜尋比較，未發現有相同的方法進行早期胚胎性別鑒定。?

發明內容：

本發明的目的在于提供一種鑒定結果好，靈敏度和準確性高的薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法。?

本發明用HOT-Start?PCR方法對薩能奶山羊早期胚胎性別進行鑒定，具體步驟如下：?

a.用手術法對供體羊進行沖胚，獲取胚胎；?

b.取6～7d的A、B級桑椹胚和早期囊胚，進行冷凍或直接在實驗室對其進行顯微取?樣鑒定；?

c.用吸取法對b.步驟得到的桑椹胚和早期囊胚進行顯微取樣，對胚胎取不同的細胞數，將取樣細胞放入PCR反應管中，準備進行DNA的提取及鑒定；取樣后的胚胎進行發育潛能培養實驗；?

d.PCR引物設計及模板DNA的制備：?

根據GeneBank收錄的綿羊的基因序列，依據綿羊Y染色體特異重復序列(Z30265)設計兩對引物，同時根據綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453548)設計兩套對照引物，其基因序列和引物序列如下：?

綿羊Y染色體特異重復序列(Z30265)：?

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