[發明專利]一種誘導煙草疫霉產生致病性分泌蛋白的方法有效
| 申請號： | 201110255064.2 | 申請日： | 2011-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN102321711A | 公開（公告）日： | 2012-01-18 |
| 發明（設計）人： | 羅華元;常壽榮;王紹坤;徐潔;周曉罡 | 申請（專利權）人： | 紅云紅河煙草（集團）有限責任公司;云南省農業科學院生物技術與種質資源研究所 |
| 主分類號： | C12P21/00 | 分類號： | C12P21/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 昆明正原專利代理有限責任公司 53100 | 代理人： | 金耀生 |
| 地址： | 650202 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 誘導 煙草 產生 致病性 分泌 蛋白 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種誘導煙草疫霉產生致病性分泌蛋白的方法，其特征在于按以下步驟進行：
（1）將煙草黑脛病樣用自來水沖洗干凈病株莖稈表面，待風干后從病健交界處取0.4cm×0.4cm髓部組織塊置于燕麥培養基，置于28℃黑暗條件下培養3～4天，獲得的煙草疫霉病菌致病性菌株，再接種到燕麥培養基上，置于28℃黑暗條件下培養3～4天；形成較大的菌落；
（2）形成較大的菌落后，將菌絲塊轉接到300mL分泌蛋白液體誘導培養基；分泌蛋白液體誘導培養基由以下部分組成：酵母浸膏0.5?-1mg/L、葡萄糖?25-30g?/L、NaH2PO4?0.5－0.75g/L、MgSO4·7H2O?0.25－0.4g/L、天門冬酰胺?1.5－2g/L、VB1?1.5－2mg/L、H2O?1L，于28℃，120rpm振蕩培養2周；?
（3）用雙層滅菌濾紙濾去菌絲體，濾液經5000rpm離心20min，上清液加入100%飽和硫酸銨溶液，于10000?rpm離心30min，沉淀經透析帶1KD處理，凍干后獲得煙草疫霉致病性分泌蛋白提取物，-20℃保存。
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