[發明專利]一種兔出血熱病毒空衣殼抗原的制備方法

有效

• 申請號: 201110254439.3
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102304529A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 張志芳;李軼女;易詠竹;王樹坤;石小峰;王石寶;張渭蛟;舒惠國
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12N15/866;A01K67/033;C07K14/08;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇;楊小蓉

1.一種兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60優化基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

2.一種重組桿狀病毒，其特征在于，通過使用包含兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60基因或權利要求1所述優化基因的桿狀病毒轉移載體DNA與桿狀病毒DNA進行重組或轉座反應后而獲得。

3.根據權利要求2所述的重組桿狀病毒，其特征在于，所述重組桿狀病毒為包含兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60基因的重組家蠶核型多角體病毒rBmNPV，或包含權利要求1所述優化基因的重組家蠶核型多角體病毒rBmNPV。

4.一種制備兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60的昆蟲生物反應器，其特征在于，通過使用表達兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60基因或權利要求1所述優化基因的重組桿狀病毒感染昆蟲宿主獲得。

5.一種兔出血熱病毒空衣殼抗原的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)構建包含兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60基因或權利要求1所述優化基因的桿狀病毒轉移載體；

2)將構建得到的轉移表達載體與桿狀病毒進行共轉染，獲得重組桿狀病毒；

3)將重組桿狀病毒感染昆蟲宿主細胞；

4)培養被感染的昆蟲宿主，表達相應的兔出血熱病毒衣殼抗原顆粒，收獲并純化所表達的抗原。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述桿狀病毒選自BmNPV、AcMNPV、ApNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或SpltNPV，優選為家蠶核型多角體病毒BmNPV。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的宿主選自鱗翅目昆蟲，優選為家蠶(Bombyx?mori)、野蠶(Bombyx?mandarina)、蓖麻蠶(Philosamia?cynthia?ricim)、樟蠶(Dictyoplca?japanica)、樗蠶(Philosamia?cynthia?pryeri)、柞蠶(Antheraea?pernyi)、日本柞蠶(Antheraea?yamamai)、野天蠶(Antheraea?polyphymus)、苜蓿尺蠖(Atographa?califorica)、茶尺蠖(Ectropis?obliqua)、甘蘭夜蛾(Mamestra?brassicae)、斜紋夜蛾(Spodoptera?littoralis)、秋粘蟲(Spodoptera?frugiperda)、粉紋夜蛾(Trichoplusia?ni)、行軍蟲(Thaumetopoea?wilkinsoni)、棉鈴蟲(Heliothis?armigera)、美國棉鈴蟲(Heliothis?zea)、煙青蟲(Heliothis?assulta)、煙草夜蛾(Heliothis?virescens)、東方粘蟲(Pseudaletia?separata)或舞毒蛾(Lymantria?dispar)，更優選為家蠶。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，

所述的昆蟲宿主是家蠶幼蟲和蛹，將重組家蠶桿狀病毒感染家蠶細胞或穿刺接種1-5齡的家蠶幼蟲或蛹，在感染3-6天后收集家蠶幼蟲或蛹的體液或組織勻漿。

9.由權利要求5～8中任一項所述方法制備的兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60。

10.權利要求9所述兔出血熱病毒衣殼蛋白VP60作為兔出血熱疫苗的應用。