[發明專利]一種兔出血熱病毒空衣殼抗原的制備方法

有效

• 申請號: 201110254439.3
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102304529A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 張志芳;李軼女;易詠竹;王樹坤;石小峰;王石寶;張渭蛟;舒惠國
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12N15/866;A01K67/033;C07K14/08;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇;楊小蓉

技術領域

本發明涉及基因工程領域，尤其涉及一種兔出血熱病毒空衣殼抗原的制備方法。

背景技術

兔病毒性出血癥俗稱兔瘟，是由兔出血癥病毒(Rabbit?hemorrhagic?disease?virus，RHDV)引起的一種急性、烈性、高度接觸性、致死性傳染病，曾是兔的一種毀滅性傳染病，因給養兔業帶來巨大的經濟損失而備受養兔業的關注。1984年中國首次報道了該病。1989年，世界動物衛生組織(OIE)將該病正式列為B類傳染病，我國將其列為二類傳染病(王永坤等，兔瘟的診斷與防治，1992)。

在2000年國際病毒分類委員會(ICTV)的第七次報告中，將兔出血熱病毒列入了杯狀病毒科(Caliciviridae)兔病毒屬(Lagovirus)。RHDV病毒粒子呈球形，無囊膜，直徑32-36nm，20面體對稱(張麗紅等，廣東畜牧獸醫科技，31：9-11，2006)，其衣殼由32個高5-6nm的圓柱狀殼粒構成，由主要結構蛋白VP60多重拷貝所組成。負染電鏡表面具有嵌杯樣病毒典型的杯狀形態結構，電鏡下還可見少數沒有核心的病毒空衣殼。

RHDV基因組含2個開放閱讀框，5’末端的長開放閱讀框架(ORF1)編碼一個2344氨基酸的多聚蛋白前體，它被病毒蛋白酶進一步分解為衣殼蛋白和多個非結構蛋白，其中衣殼蛋白為病毒的主要結構蛋白，稱為VP60，與誘導抗病毒感染的免疫反應直接相關。3’末端的短開放閱讀框架(ORF2)，位于7025-7378bp之間，編碼病毒另一個小的結構成分，稱為VP10。

VP60的N-端組成衣殼蛋白的內部區，C-端組成衣殼蛋白的外部。N-端的第31-250之間的氨基酸是主要的抗感染免疫決定區。對VP60蛋白的研究發現，體外表達該衣殼蛋白時，在沒有其他任何成分存在的條件下，可自然聚合成不包裹核酸的、與天然RHDV病毒粒子在物理形態上類似的病毒樣顆粒(Rob?N，Virus-like?particle?as?immunogens，Trends?in?Microbiology，11：438-444，2003)。

近年來，應用病毒樣顆粒作為疫苗的抗原載體越來越受到廣大科學家的重視。病毒樣顆粒是模擬病毒的顆粒形態特點，將外源基因片段產物呈遞到病毒顆粒表面而形成的嵌合顆粒，它的外部形態與病毒顆粒相同，甚至還有某些病毒受體的天然配體，同時，還可將其他病原的特異性抗原等呈遞在自己的表面，因而在病原體的疫苗研究中發揮著重要的作用。VLPs常可以誘導產生較滅活疫苗和可溶性多肽更為強烈的體液免疫應答，因為其表面是以非感染性的顆粒狀態模擬天然抗原呈遞過程來呈遞糖蛋白抗原的，而該法提呈引起的免疫應答優于溶解狀態，故在保護作用中起重要作用的糖蛋白抗原引起的免疫應答可望更接近自然感染，這樣，病毒樣顆粒更有可能廣泛用于疫苗的研制。而且，VLPs由于不包裹核酸，不能復制，因此也沒有感染性，是一種安全的抗原載體(Nagesha?H?S，Virus-like?particles?of?calicivirus?as?epitope?carriers，Arch?Virol，144：2429-2439，1999)。