[發(fā)明專利]高速逆流色譜法用于忍冬中分離制備出咖啡鞣酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110253166.0
• 申請日: 2011-08-31
• 公開（公告）號: CN102381974A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅磊;朱文學(xué);樊金玲;李欣;白喜婷;關(guān)隨霞;李鑫玲;郝英超
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48
• 代理公司: 洛陽市凱旋專利事務(wù)所 41112
• 代理人: 符繼超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物分離技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及到一種高速逆流色譜法用于忍冬中分離制備出咖啡鞣酸的方法。

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背景技術(shù)

2005年版《中國藥典》規(guī)定：忍冬科植物忍冬（Lonicera?japonica?Thunb）為金銀花藥材的法定植物來源。

忍冬是一種“藥食同源”的綠色天然產(chǎn)物，忍冬含有咖啡鞣酸，化學(xué)名稱為：1，3，4，5-四羥基環(huán)己烷羧酸-（3，4-二羥基肉桂酸酯）；屬于咖啡酰奎尼酸衍生物。

咖啡鞣酸被認(rèn)為是眾多藥材和中成藥中抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分。據(jù)報道，咖啡鞣酸的主要生物活性有：

（1）對透明質(zhì)酸酶及葡萄糖-6-磷酸酶具有抑制作用；

（2）對自由基的清除及抗脂質(zhì)具有過氧化作用；

（3）具有抗誘變作用；

（4）具有保肝利膽作用；

（5）具有抗菌、抗病毒及解痙攣?zhàn)饔谩?/p>

咖啡鞣酸是保健食品、藥品、化妝品的重要原料。所以從忍冬中提取咖啡鞣酸可以大大提高忍冬的經(jīng)濟(jì)價值。目前從忍冬中分離制備咖啡鞣酸的方法有溶劑提取法、大孔吸附樹脂法以及高效液相色譜法等。溶劑提取法操作麻煩，耗費(fèi)大量溶劑，污染環(huán)境，產(chǎn)量低，且產(chǎn)品純度也不高；大孔吸附樹脂法分離周期長，耗費(fèi)大量溶劑，污染環(huán)境，而且柱子清洗麻煩，生產(chǎn)成本高操作麻煩；高效液相色譜（制備型）法雖然具有處理時間短、產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)，但高昂的成本使其不能用于大規(guī)模生產(chǎn)。

高速逆流色譜（High-speed?countercurrent?chromatography,?HSCCC）法是一種連續(xù)的無需固體支撐體的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，其原理是利用流體動力學(xué)平衡現(xiàn)象來實(shí)現(xiàn)對化合物的高速分離。在這樣的動力平衡中，兩種互不混溶的溶劑在轉(zhuǎn)動螺旋管中單向地分布。高速逆流色譜儀工作時，色譜儀中的螺旋管做行星運(yùn)動，由于重力及螺旋管力的作用，固定相移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同時兩相溶劑在螺旋管中得以混合。由于不同溶質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)不同，溶質(zhì)在兩相溶劑中進(jìn)行分配平衡，從而使不同成分得以分離。但高速逆流色譜法用于忍冬中分離制備出咖啡鞣酸的方法未見報道。

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發(fā)明內(nèi)容

為解決上述利用忍冬分離制備咖啡鞣酸技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供了一種高速逆流色譜法用于忍冬中分離制備出咖啡鞣酸的方法，該方法先從忍冬中提取咖啡鞣酸粗提液；在確定高速逆流色譜法中固定相和流動相的溶劑體系的基礎(chǔ)上，通過控制高速逆流色譜儀的分離參數(shù)分離咖啡鞣酸粗提液，最終制備出純度達(dá)95%以上的咖啡鞣酸。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種高速逆流色譜法用于忍冬中分離制備出咖啡鞣酸的方法，該方法包括制備忍冬水取液、制備忍冬醇沉提取液、萃取制備咖啡鞣酸粗提液、制備固定相和流動相的溶劑體系、高速逆流色譜法分離純化過程五個工藝步驟，該五個工藝步驟分述如下：?

①制備忍冬水取液

將忍冬干燥粉碎并過40目篩后裝于提取罐中并用去離子水進(jìn)行浸提，忍冬與所述去離子水的重量比為1:8~10，所述去離子水的溫度控制在60~90℃，所述浸提的時間控制在1~2h，將所述去離子水+忍冬形成的浸提液趁熱過濾并冷卻，分別制備出忍冬水取液和忍冬殘留液；

②制備忍冬醇沉提取液

將①中制備出的所述忍冬水取液裝入第一反應(yīng)皿中，再向第一反應(yīng)皿加入無水乙醇直至反應(yīng)皿中乙醇濃度達(dá)到體積百分比60~80%時為止，放置過夜后對所述忍冬水+乙醇進(jìn)行過濾得到過濾液，再對所述過濾液進(jìn)行減壓回收出乙醇并制備出忍冬醇沉提取液；

③萃取制備咖啡鞣酸粗提液

將②中制備出的所述忍冬醇沉提取液裝入第二反應(yīng)皿中，再向第二反應(yīng)皿中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，所加乙酸乙酯與忍冬醇沉提取液的重量比為2:1，然后用質(zhì)量百分比濃度為37.5%的鹽酸調(diào)節(jié)第二反應(yīng)皿中的pH值直至達(dá)到pH=1~3為止，所述萃取時間控制在1~2h，最后收集出乙酸乙酯層并制備出咖啡鞣酸粗提液；

④制備固定相和流動相的溶劑體系

按體積比將乙酸乙酯:乙醇:水=1~5:1~2:2~5放在第三反應(yīng)皿中進(jìn)行混合組成溶劑體系，待靜置后第三反應(yīng)皿中所述溶劑體系自然分為上相和下相，所述上相簡稱為固定相，所述下相簡稱為流動相，將所述固定相置于第四反應(yīng)皿中，將所述流動相置于第五反應(yīng)皿中；

⑤高速逆流色譜法分離純化過程