[發明專利]人工合成雞干擾素基因序列及其重組工程菌的構建與應用

有效

• 申請號: 201110251626.6
• 申請日: 2011-08-30
• 公開（公告）號: CN102321631A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 趙德剛;宋莉;盧凌霄
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N15/21
• 分類號: C12N15/21;C12N15/23;C12N15/81;C12N1/19;C12P21/02;C12R1/865
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.一種人工合成的雞干擾素基因YEChIFNR，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO1所示。

2.一種人工合成的雞干擾素基因YEChIFNG，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO2所示。

3.一種重組表達載體，具有權利要求1或2所述的人工合成的雞干擾素基因YEChIFNR，或YEChIFNG，其骨架載體為pYES2/CT。

4.一種重組工程菌，具有權利要求1或2所述的人工合成的雞干擾素基因YEChIFNR，或YEChIFNG，所述受體菌為釀酒酵母菌株INVSc1。

5.權利要求4所述的重組工程菌生產藥用蛋白雞干擾素的方法，包括如下步驟：

(1)、酵母菌的培養：保種的重組工程菌接種于SC選擇培養基上，于30℃，200r/min過夜震蕩培養；

(2)、酵母菌的誘導表達培養：當過夜培養的新鮮菌液OD₆₀₀＝0.3-0.5時，離心收集菌體并用含半乳糖的液體誘導培養基重懸，并于30℃、200r/min振蕩培養。

6.根據權利要求5所述的方法，所述步驟(2)的培養條件為：誘導12h，重組菌液發酵pH值為3.8-4.0，2.5％的半乳糖濃度。

7.根據權利要求5所述的方法，所述步驟還包括保種的重組工程菌的制備方法，將重組工程菌在YPD篩選培養基培養，菌落PCR篩選，挑取陽性克隆單菌落，SC選擇培養基，30℃振蕩過夜培養保種。

8.根據權利要求7所述的方法，所述SC選擇培養基為：0.8％Ura缺陷培養基粉+2％葡萄糖；所述YPD篩選培養基為：2％胰蛋白胨+1％酵母提取物，2％葡萄糖+60mg/l?Amp；所述誘導培養基為0.8％Ura缺陷培養基粉+2％半乳糖+1％棉子糖或者2％葡萄糖。

9.根據權利要求5所述的方法，所述步驟還包括菌體細胞的裂解，所述步驟(2)的酵母菌培養到對數生長期時，取出轉速1500rpm/min離心5min收集菌體，滅菌水重懸菌體細胞之后，10000r/min離心30s，得菌體細胞用裂解緩沖液重懸。

10.根據權利要求9所述的方法，所述菌體細胞裂解前液氮冷凍后置-80℃保存備用，裂解緩沖液重懸的OD₆₀₀＝50-100。