[發明專利]一種β-半乳糖苷酶的突變體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201110247338.3
• 申請日: 2011-08-26
• 公開（公告）號: CN102337254A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 吳敬;陳晟;吳玉飛;陳堅;夏澤華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/38
• 分類號: C12N9/38;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/14
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種β-半乳糖苷酶的突變體，其特征是將硫礦硫化葉菌（Sulfolobus?solfataricus?）的β-半乳糖苷酶活性中心附近苯丙氨酸突變為酪氨酸，所述硫礦硫化葉菌的β-半乳糖苷酶的氨基酸序列與NCBI數據庫中硫礦硫化葉菌的β-糖苷酶的基因lacS基因編碼的氨基酸序列相同,lacS基因編號為AE006641。

2.權利要求1所述的突變體，其特征是第441位氨基酸苯丙氨酸突變為酪氨酸，命名為F441Y。

3.權利要求1所述的突變體的制備方法，其特征是在硫礦硫化葉菌β-半乳糖苷酶晶體結構的基礎上確定突變位點；設計定點突變的突變引物，以攜帶β-半乳糖苷酶基因的載體為模板進行定點突變構建突變質粒；將突變質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)細胞，挑選驗證后的陽性單克隆進行發酵培養，25℃恒溫培養至24?h，收集細胞、用緩沖液懸浮后，80℃水浴熱處理30min，離心取上清，得到突變體F441Y。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述攜帶β-半乳糖苷酶的載體為pUC系列，pET系列，pT7-7，或pGEX中的任一一種。

5.權利要求1所述突變體的應用，其特征在于最適溫度為70℃，最適pH為6.5，低聚半乳糖產量達到61%。