[發(fā)明專利]一種加壓毛細(xì)管電色譜檢測(cè)鰻魚(yú)中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110246660.4
• 申請(qǐng)日: 2011-08-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102955008A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王陽(yáng)光;歐陽(yáng)小琨;董潔瑩;楊立業(yè);李大東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江海洋學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 寧波誠(chéng)源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全-獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種采用毛細(xì)管電色譜儀檢測(cè)鰻魚(yú)中磺胺類(lèi)藥物的分析方法，具體的說(shuō)是采用毛細(xì)管電色譜法同時(shí)測(cè)定魚(yú)肉中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺二甲異噁唑五種磺胺類(lèi)藥物的方法。

背景技術(shù)

磺胺類(lèi)藥物是指具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類(lèi)藥物的總稱，是一類(lèi)用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)治療藥物。因其具有抗菌譜廣、抗球蟲(chóng)和價(jià)廉易得等特點(diǎn)，至今仍在獸醫(yī)臨床和畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用。磺胺類(lèi)藥物是國(guó)家允許限量使用的一類(lèi)抗菌藥物，可被飼料生產(chǎn)者采用。目前，國(guó)家農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《NY?5070無(wú)公害食品水產(chǎn)品中魚(yú)藥殘留限量》中規(guī)定，磺胺類(lèi)藥物在水產(chǎn)品組織中的最高殘留總量為0.1mg/kg。該藥在體內(nèi)的代謝時(shí)間較長(zhǎng)，當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí)就會(huì)對(duì)人體的機(jī)能產(chǎn)生損害，破壞人的造血系統(tǒng)，造成溶血性貧血，磺胺二甲基嘧啶等還存在潛在的致癌性。因此，為保護(hù)消費(fèi)者的健康安全，建立靈敏、準(zhǔn)確、快速的水產(chǎn)品中磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)方法是十分緊迫的。

目前磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)方法主要包括免疫學(xué)方法、微生物學(xué)法、高效液相色譜法、氣相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、薄層色譜法和毛細(xì)管電泳法等。我國(guó)農(nóng)業(yè)部頒布的檢測(cè)方法有“動(dòng)物源食品中磺胺類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法-高效液相色譜法”、“動(dòng)物性食品中磺胺二甲嘧啶檢測(cè)方法-高效液相色譜法”。這些方法優(yōu)缺點(diǎn)各異：微生物學(xué)法檢測(cè)速度較快，但檢測(cè)靈敏度和特異性較差；薄層色譜法靈敏度、選擇性較好，但重復(fù)性不夠好；毛細(xì)管電泳最大的不足是其進(jìn)樣量小，限制了靈敏度、無(wú)法測(cè)定μg/kg級(jí)或更低濃度的殘留量。液質(zhì)聯(lián)用儀雖然檢測(cè)靈敏度和分辨率很高，但一般實(shí)驗(yàn)室很難配置這樣的儀器。

加壓毛細(xì)管電色譜(pCEC)是近幾年來(lái)興起的一種微分離技術(shù)，它結(jié)合了電泳的高效性和高效液相色譜的保留機(jī)制，通過(guò)在填有HPLC填料的毛細(xì)管色譜柱的兩端施加高壓，提高了樣品的分離能力和效率，使以前需很長(zhǎng)時(shí)間才能出現(xiàn)的峰現(xiàn)在只需很短時(shí)間就可出現(xiàn)，并且試劑和樣品的消耗量減少，近幾年開(kāi)始也用于獸藥殘留的分離。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種加壓毛細(xì)管電色譜儀檢測(cè)鰻魚(yú)中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法，能同時(shí)測(cè)定鰻魚(yú)中多種磺胺類(lèi)藥物殘留，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的特點(diǎn)。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：一種加壓毛細(xì)管電色譜儀檢測(cè)鰻魚(yú)中磺胺類(lèi)藥物殘留的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)樣品制備：將鰻魚(yú)肌肉組織樣品剪碎后均質(zhì)，冷凍保存；

2)樣品預(yù)處理：將樣品經(jīng)乙酸乙酯離心提取，HLB固相萃取柱凈化，再經(jīng)0.20～0.24μm濾膜過(guò)濾后供毛細(xì)管電色譜測(cè)定用；

3)配制磺胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；

4)采用加壓毛細(xì)管電色譜進(jìn)行分析：以反相鍵和C18為填料的毛細(xì)管電色譜柱作為檢測(cè)柱；流動(dòng)相采用4～6mmol/L，pH?5.5～6.5的磷酸氫二鈉溶液與乙腈的混合液，其體積比為80～60∶20～40；在所加電壓為9～11kv，柱壓為7.5～8MP，柱溫為常溫，流動(dòng)相的流速：40～60μL/min；進(jìn)樣量：0.9～1.1μL的工藝條件下，用紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)270nm處進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

5)將樣品經(jīng)檢測(cè)分析后根據(jù)其保留時(shí)間進(jìn)行定量分析，利用外標(biāo)法根據(jù)其峰面積進(jìn)行定量分析。

作為改進(jìn)，所述步驟2)中的乙酸乙酯離心提取的具體過(guò)程為：準(zhǔn)確稱取5±0.01g均質(zhì)樣品置于50mL離心管中，加入4～6g干燥的無(wú)水硫酸鈉和10～20mL乙酸乙酯，用渦旋混合器充分混勻2～3min，4000～6000r/min離心8～12min，將上清液轉(zhuǎn)移到100mL分液漏斗中，再向原離心管中加入10～15mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并兩次上清液于分液漏斗中，加入10～20mL正己烷，振蕩使其充分混合，靜置，棄正己烷層，將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移到150mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，25～35℃真空旋轉(zhuǎn)蒸至無(wú)液體殘留，用0.8～1.2mL乙腈、1.5～2.5mL體積分?jǐn)?shù)為0.9～1.1％磷酸溶液溶解得到提取液。

作為改進(jìn)，所述步驟2)中的HLB固相萃取柱凈化的具體過(guò)程為：用4～6mL乙腈活化HLB固相萃取小柱，再用4～6mL去離子水沖洗小柱，轉(zhuǎn)移過(guò)多的乙腈，將提取液加到小柱上，保持1.5～2.5mL/min的流速過(guò)柱，再依次用4～6mL水、2～4mL體積分?jǐn)?shù)1.8～2.2％乙腈溶液淋洗小柱，最后用5～7mL?95％乙腈水溶液洗脫固相萃取小柱，分步洗脫，收集濾液并用氮吹儀吹干，用0.9～1.1mL流動(dòng)相定容。