[發明專利]一種加壓毛細管電色譜檢測鰻魚中磺胺類藥物殘留的方法

有效

• 申請號: 201110246660.4
• 申請日: 2011-08-23
• 公開（公告）號: CN102955008A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 王陽光;歐陽小琨;董潔瑩;楊立業;李大東
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

1.一種加壓毛細管電色譜儀檢測鰻魚中磺胺類藥物殘留的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)樣品制備：將鰻魚肌肉組織樣品剪碎后均質，冷凍保存；

2)樣品預處理：將樣品經乙酸乙酯離心提取，HLB固相萃取柱凈化，再經0.20～0.24μm濾膜過濾后供毛細管電色譜測定用；

3)配制磺胺標準溶液；

4)采用加壓毛細管電色譜進行分析：以反相鍵和C18為填料的毛細管電色譜柱作為檢測柱；流動相采用4～6mmol/L，pH?5.5～6.5的磷酸氫二鈉溶液與乙腈的混合液，其體積比為80～60∶20～40；在所加電壓為9～11kv，柱壓為7.5～8MP，柱溫為常溫，流動相的流速：40～60μL/min；進樣量：0.9～1.1μL的工藝條件下，用紫外檢測器在波長270nm處進行檢測，同時繪制標準曲線；

5)將樣品經檢測分析后根據其保留時間進行定量分析，利用外標法根據其峰面積進行定量分析。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟2)中的乙酸乙酯離心提取的具體過程為：準確稱取5±0.01g均質樣品置于50mL離心管中，加入4～6g干燥的無水硫酸鈉和10～20mL乙酸乙酯，用渦旋混合器充分混勻2～3min，4000～6000r/min離心8～12min，將上清液轉移到100mL分液漏斗中，再向原離心管中加入10～15mL乙酸乙酯重復提取一次，合并兩次上清液于分液漏斗中，加入10～20mL正己烷，振蕩使其充分混合，靜置，棄正己烷層，將乙酸乙酯層轉移到150mL旋轉蒸發瓶，25～35℃真空旋轉蒸至無液體殘留，用0.8～1.2mL乙腈、1.5～2.5mL體積分數為0.9～1.1％磷酸溶液溶解得到提取液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟2)中的HLB固相萃取柱凈化的具體過程為：用4～6mL乙腈活化HLB固相萃取小柱，再用4～6mL去離子水沖洗小柱，轉移過多的乙腈，將提取液加到小柱上，保持1.5～2.5mL/min的流速過柱，再依次用4～6mL水、2～4mL體積分數1.8～2.2％乙腈溶液淋洗小柱，最后用5～7mL?95％(體積比)乙腈水溶液洗脫固相萃取小柱，分步洗脫，收集濾液并用氮吹儀吹干，用0.9～1.1mL流動相定容。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述磺胺為磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑和磺胺二甲異噁唑的五種，所述磺胺標準溶液的配制為：稱取各磺胺類標準品10.0mg±0.01g，用乙腈溶解并定容于100ml容量瓶中，配成質量濃度為100mg/L標準儲備溶液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸氫二鈉溶液為5mmol/L，pH6.0，所述流動相的配制過程為：取乙腈、重蒸水、50mmol/L磷酸二氫鈉按體積比30∶60∶10的比例配制流動相，超聲波脫氣20～40min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述磺胺標準溶液在檢測前需用流動相稀釋成0.5～5μg/mL的標準工作液。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述毛細管電色譜柱選用規格為EP-100-20/45-3-C₁₈，內徑100μm，有效柱長20cm，填料粒徑3μm?ODS。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)的所加電壓為10kv，柱壓為7.8MP，柱溫為常溫，流動相的流速：50μL/min；進樣量：1.0μL。