[發(fā)明專利]利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進(jìn)行快速繁殖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110246432.7
• 申請日: 2011-08-24
• 公開（公告）號: CN102405836A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙好戰(zhàn);王百田;胡文芳;付麗華;張燕;崔青凱;李振勤
• 申請（專利權(quán)）人: 北京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 石家莊國域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 蘇艷肅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物種苗繁殖技術(shù)，具體地說是利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進(jìn)行快速繁殖的方法。

背景技術(shù)

彩葉丁香(Syringa?vulgaris?L.)葉片帶有灑金斑點(diǎn)，在陽光照射下非常醒目。它根系發(fā)達(dá)、植株長勢旺盛，萌蘗力和抗旱能力較強(qiáng)，并且冬天落葉遲，是不可多得的城市綠化美化樹種。但作為近幾年從歐洲引進(jìn)的一個新品種，可供扦插、嫁接的數(shù)目少，既限制了其繁殖速度，也不利于其優(yōu)良性狀的保持，因而無法滿足日益增加的社會需求。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)彩葉丁香種苗是解決這一生產(chǎn)問題的有效途徑。然而同其它木本植物一樣，玻璃化是其組織培養(yǎng)需要解決的難題之一，而且對于彩葉丁香這類觀賞彩葉類樹種，由于其有不少遺傳學(xué)上的嵌合體，如一些鑲嵌色彩的種子，帶金邊、銀邊、花葉植物，在培養(yǎng)過程中，嵌合體各組分可能分離，使雜色體的植物將顯示出改變的形態(tài)或完全喪失雜色形狀，從而更加大了培養(yǎng)難度。只有通過改良培養(yǎng)條件，達(dá)到兼顧提高繁殖量、保持遺傳性狀和減少玻璃化的目的，才能通過批量組培實(shí)現(xiàn)彩葉丁香的快速繁殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進(jìn)行快速繁殖的方法，既可快速繁殖，又能保證其遺傳學(xué)特性、減少玻璃化發(fā)生率，以滿足城市綠化美化的需求。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：利用組織培養(yǎng)對彩葉丁香進(jìn)行快速繁殖的方法包括以下步驟：

(1)外植體的采集與消毒：將除掉葉片的彩葉丁香的莖段依次進(jìn)行清洗、紫外照射、酒精消毒，再放入0.1％HgC12溶液消毒滅菌5min，所述消毒滅菌液中加入占滅菌液重量百分比0.5％的吐溫-80，最后用無菌水沖洗，再切成帶2-3個腋芽的1～1.5cm長的莖段；

(2)將前步所得莖段接種到外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.1mg/l+NAA0.01mg/l，彩葉丁香芽苗誘導(dǎo)30天至小芽長4-5cm長；

(3)將前步所得小苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)20天，在組培的前10代，所述繼代培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l；從第11代起所述繼代培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l；從第17代起所述繼代培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l+硫酸慶大霉素4萬單位/1；

(4)取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中：1/2MS+NAA0.1mg/l，培養(yǎng)40天；

(5)將培養(yǎng)瓶置于溫室中自然光煉苗2-3天后，將生根幼植株取出并在0.1％的高錳酸鉀溶液中進(jìn)行漂洗；

(6)漂洗后的生根幼株種植于栽培基質(zhì)并放于大棚內(nèi)培養(yǎng)，單株套透明塑料袋，保持90％的相對濕度，光照強(qiáng)度為2000-4000lux；一周后棄袋；所述栽培基質(zhì)為消毒滅菌后的草炭；當(dāng)小苗長至20-30cm時移栽至大田苗圃進(jìn)行栽植。

本發(fā)明第(1)步中，在對外植體的滅菌中，在滅菌劑中加入吐溫-80可以降低植物材料表面的張力，達(dá)到更好的消毒效果，在0.1％HgC12溶液中加入0.1％的吐溫-80，污染率隨著吐溫-80的增加逐漸降低，而枯死率則隨吐溫-80的增加逐漸增高，即加入吐溫會對材料的傷害也在增加，所以應(yīng)注意用量和滅菌時間。綜合分析，加入滅菌液的0.5％，即在100ml滅菌液中加入15滴吐溫-80，使藥劑更易于展布，更容易浸入到滅菌的材料表面。污染率隨滅菌時間的延長逐漸降低，而枯死率則隨滅菌時間的延長逐漸增高。綜合分析以上結(jié)果表明，用0.1％HgC12，滅菌5min成活率可達(dá)80％，效果最好，時間太長，材料容易死亡，時間太短滅菌不徹底，易造成污染。

本發(fā)明第(2)步中，彩葉丁香腋芽在第10天就開始萌動，15天伸長并長出嫩葉，30天莖段芽點(diǎn)誘導(dǎo)成高4-5cm，具有8余片葉子的芽苗。

本發(fā)明第(3)步中，按組培代數(shù)不同，選擇不同的培養(yǎng)基，以兼顧控制褐化、不影響增殖率和減少玻璃化三方面，從而達(dá)到效益最大化。

本發(fā)明第(4)步中，取2-3cm長的無根幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，大約12d左右開始生根，培養(yǎng)40天后，根系主根粗壯，側(cè)根發(fā)達(dá)，苗壯，葉綠，長勢好，試管苗小苗長至5cm以上時，幾乎占滿整個接種瓶，這時即可進(jìn)行移栽。

本發(fā)明第(5)步中，試管苗移栽前，煉苗2-3天，此時可適當(dāng)加大光照，以提高小苗的木質(zhì)化程度。用0.1％的高錳酸鉀溶液中進(jìn)行漂洗，不僅可以洗去組培苗上的培養(yǎng)基而且也對小苗進(jìn)行了殺菌處理并且沒有藥害的產(chǎn)生。