[發(fā)明專利]一種超低分子肝素鈉的制備方法及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110245021.6
• 申請日: 2011-08-25
• 公開（公告）號: CN102952202A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王芃
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州鴻洋醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10;A61K31/727;A61P7/02
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種超低分子肝素鈉(ULMWH)的制備方法及所述超低分子肝素鈉的藥物應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝素是一種來自于動物的硫酸化多糖，在臨床上常被作為主要的抗凝、抗血栓藥物來使用。但由于使用肝素有較高的出血危險性，它的使用需要進行醫(yī)務(wù)觀察，并及時調(diào)整劑量，因此它的臨床使用有很大的局限性。

低分子肝素是從普通肝素通過不同的方法降解得到的小分子肝素制品，具有生物利用率高、血漿半衰期長等優(yōu)點，特別是其引起的出血副作用大幅降低。但低分子肝素的抗FIIa值仍舊較高，如通過專利EP0040144方法制備得到的低分子肝素的抗FIIa值在30左右，抗FXa/抗FIIa的比值在3.5～5.5。使用這類低分子肝素，雖然較普通肝素的安全性有大幅提高，但仍有一定的出血危險性。同樣，在美國專利US6384021中報道了一種很低分子量肝素的合成方法，雖然得到的很低分子量肝素的分子量較低，但它的抗FXa值不超過120IU/mg，抗FXa/抗FIIa比值在15～50之間。

超低分子肝素是比低分子肝素鈉平均分子量更小(通常低于3000道爾頓)，抗FIIa值更低的一類肝素衍生物。與低分子肝素相比，超低分子肝素具抗凝作用安全，其抗血栓作用強，皮下注射易吸收，主要用于血栓栓塞性疾病的預(yù)防，如腎病綜合癥，手術(shù)后靜脈血栓的形成、老年靜脈血栓和心腦血管疾病的預(yù)防以及防治高血脂癥等。中國專利CN200810020765報道了超低分子肝素的一種制備方法，但利用這種制備方法得到的超低分子肝素抗FXa活性低，難以滿足臨床要求，且工業(yè)化生產(chǎn)的可行性不高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種超低分子肝素鈉的制備方法，該制備方法降解條件溫和可減少磺酸基從肝素上的脫落，通過該方法制備的超低分子肝素鈉平均分子量小于3000Da，具有高抗Fxa生物活性。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明一種超低分子肝素鈉的制備方法，包括如下步驟：

(1)取精品肝素配成10％的水溶液，室溫下邊攪拌邊加入季銨鹽如芐索氯銨，1～2小時后停止攪拌，沉降、傾倒、洗滌沉淀物，最后過濾、干燥，得到白色肝素季銨鹽固體；

(2)將(1)中的肝素季銨鹽固體溶解于有機溶劑(無水二氯甲烷)中配成5％～10％的溶液，加入與肝素季銨鹽等量的氯化芐，30℃～35℃下，攪拌反應(yīng)24小時后，冷至室溫，加入2倍體積的10％醋酸鈉/甲醇溶液，攪拌30分鐘后，靜止沉淀，過濾，甲醇洗滌，室溫下真空干燥，得到肝素的酯化物；

(3)將(2)得到的肝素酯化物溶于10倍的水中配成溶液，將2.3～2.5倍的酯化物量的芐索氯銨溶于10倍的水中，完全溶解后，室溫、劇烈攪拌下將此溶液慢慢加入到肝素酯化物的水溶液中；添加完成后，繼續(xù)攪拌1-2小時，然后停止攪拌；待白色固體沉降后，傾去上層清夜，加水洗滌，過濾，再洗滌，然后真空下干燥(不高于50℃)，得到肝素酯化物的季銨鹽；

(4)將(3)得到的肝素酯化物的季銨鹽溶于10倍的干燥的二氯甲烷中，待溶解后，加入0.05～0.5摩爾濃度的有機堿如芐基三甲基氫氧化銨、在溫度為30℃～35℃下反應(yīng)4～24小時(優(yōu)選8～12小時)進行β-消除降解；

(5)將(4)反應(yīng)結(jié)束后的降解物，在室溫下加入兩倍體積的10％的醋酸鈉的甲醇溶液，攪拌1～2小時后，在0℃～4℃下沉降、過濾、甲醇洗滌，在25℃～35℃下真空干燥，得到超低分子肝素鈉的粗品；

(6)上述(5)中的超低分子肝素鈉粗品配成10％的溶液，0℃～4℃下加入氫氧化鈉溶液，調(diào)pH在9～10，并在此溫度下反應(yīng)3小時；而后用1M鹽酸中和，加入氯化鈉至鹽度為8～10％，用5倍的甲醇沉淀，沉淀物用甲醇洗滌，真空干燥；

(7)上述(6)中的低分子肝素鈉粗品配成10％的溶液，1M氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為9～10，加入30％的過氧化氫室溫攪拌6小時后，滴加1M的鹽酸至中性，然后加入8～10％的氯化鈉，再用5倍的甲醇沉淀超低分子肝素鈉；過濾，用甲醇洗滌后干燥制得低分子肝素鈉的精品；

(8)將上述(7)得到的產(chǎn)物溶于水配成10％的溶液后，添加氯化鈉至濃度為10％，用5倍體積的甲醇沉淀，過濾，甲醇洗滌，真空干燥得到超低分子肝素鈉精品；