[發(fā)明專利]生產(chǎn)伽馬-羧化的蛋白的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110241382.3
• 申請(qǐng)日: 2004-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN102443548A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·芬格;A·勒夫格倫;A·特林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿斯特拉曾尼卡有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19;C12N5/10;C12N15/81;C12N15/85;C12P21/02;C12N9/74;C07K14/745;C07K14/47;A61K38/48;A61K38/36;A61K38/17;A61P7/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍;劉健

1.一種包含表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，所述表達(dá)載體包含編碼需要伽馬-羧化作用的蛋白的核酸分子和相連的包含第一啟動(dòng)子的表達(dá)控制序列，和編碼γ-谷氨酰羧化酶的核酸分子和相連的包含第二啟動(dòng)子的表達(dá)控制序列，其中所述第一啟動(dòng)子比所述第二啟動(dòng)子更強(qiáng)，足以使得需要伽馬-羧化作用的蛋白和γ-谷氨酰羧化酶以至少10∶1的比例表達(dá)。

2.如權(quán)利要求1中所要求的宿主細(xì)胞，其中所述核酸分子在單個(gè)表達(dá)載體中。

3.如權(quán)利要求1或2中所要求的宿主細(xì)胞，其中所述第一啟動(dòng)子是人類巨細(xì)胞病毒(hCMV)即時(shí)-早期啟動(dòng)子，和所述第二啟動(dòng)子是SV40早期啟動(dòng)子。

4.一種細(xì)胞，其被工程化以表達(dá)(i)需要伽馬-羧化作用的蛋白，和(ii)γ-谷氨酰羧化酶，其中所述蛋白(i)和(ii)以10∶1到500∶1之間的比例表達(dá)。

5.如權(quán)利要求1到4中任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白選自由凝結(jié)因子VII、凝結(jié)FVII、凝結(jié)因子IX、凝結(jié)FIX、凝血酶原、凝結(jié)因子II、凝結(jié)FII、凝結(jié)因子X、凝結(jié)FX、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、骨Gla蛋白、基質(zhì)Gla蛋白、生長停滯-特異性蛋白6和Acanthophiinae?FXa-樣蛋白構(gòu)成的組。

6.如權(quán)利要求1到4的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是維生素K依賴性凝結(jié)因子。

7.如權(quán)利要求1到6的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是因子IX。

8.如權(quán)利要求1到6的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是因子X。

9.如權(quán)利要求1到6的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是凝血酶原。

10.如權(quán)利要求1到9的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是人類蛋白。

11.如權(quán)利要求1到10的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中γ-谷氨酰羧化酶是人類蛋白。

12.如權(quán)利要求1到11的任何一個(gè)所要求的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞選自由哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞構(gòu)成的組。

13.如權(quán)利要求12所要求的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

14.一種遺傳修飾的真核宿主細(xì)胞，包括：

(i)編碼γ-谷氨酰羧化酶蛋白的多核苷酸序列，其中所述γ-谷氨酰羧化酶蛋白編碼序列可操作地與表達(dá)控制序列連接，所述表達(dá)控制序列允許所述細(xì)胞表達(dá)γ-谷氨酰羧化酶蛋白；和

(ii)編碼需要所述γ-谷氨酰羧化酶蛋白的羧化作用的蛋白的多核苷酸，可操作地與表達(dá)控制序列連接，所述表達(dá)控制序列允許所述細(xì)胞表達(dá)所述需要羧化作用的蛋白；

其中所述細(xì)胞能夠以至少1∶10的比例表達(dá)所述γ-谷氨酰羧化酶蛋白和所述需要羧化作用的蛋白。

15.一種載體，包含編碼需要伽馬-羧化作用的蛋白的核酸分子和相連的包含第一啟動(dòng)子的表達(dá)控制序列，和編碼γ-谷氨酰羧化酶的核酸分子和相連的包含第二啟動(dòng)子的表達(dá)控制序列，其中所述第一啟動(dòng)子比所述第二啟動(dòng)子更強(qiáng)，足以使得需要伽馬-羧化作用的蛋白和γ-谷氨酰羧化酶以至少10∶1的比例表達(dá)。

16.如權(quán)利要求3中所要求的載體，其中所述第一啟動(dòng)子是人類巨細(xì)胞病毒(hCMV)即時(shí)-早期啟動(dòng)子，和所述第二啟動(dòng)子是SV40早期啟動(dòng)子。

17.如權(quán)利要求3或4中所要求的載體，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白選自由凝結(jié)因子VII、凝結(jié)FVII、凝結(jié)因子IX、凝結(jié)FIX、凝血酶原、凝結(jié)因子II、凝結(jié)FII、凝結(jié)因子X、凝結(jié)FX、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、骨Gla蛋白、基質(zhì)Gla蛋白、生長停滯-特異性蛋白6和Acanthophiinae?FXa-樣蛋白構(gòu)成的組。

18.如權(quán)利要求15到17的任何一個(gè)所要求的載體，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是因子IX。

19.如權(quán)利要求15到17的任何一個(gè)所要求的載體，其中所述需要伽馬-羧化作用的蛋白是因子X。