[發(fā)明專利]一種通過懸浮培養(yǎng)提高韃靼蕎麥不定芽分化率的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110238818.3
• 申請(qǐng)日: 2011-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN102405833A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃萱;徐子勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 西安恒泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種通過懸浮培養(yǎng)提高韃靼蕎麥不定芽分化的方法。

背景技術(shù)

蕎麥?zhǔn)寝た?Polygonaceae)、蕎麥屬(Fagopyrum?Mill)雙子葉禾谷類作物，主要栽培種有甜蕎(F.esculentum?Moench，也稱普通蕎麥)和苦蕎(F.tartaricum(L.)Gaerth，也稱韃靼蕎麥)。蕎麥?zhǔn)俏┮缓刑J丁的糧食作物，被逐漸發(fā)現(xiàn)利用研究，營(yíng)養(yǎng)豐富，對(duì)中老年人的減肥、延年益壽和增加兒童智力發(fā)育可起到良好的作用，并對(duì)肺病、肝臟病、糖尿病、痢疾等疾病有明顯的治療作用，并且含有多種維生素和礦物質(zhì)。我國(guó)勞動(dòng)人民很早就認(rèn)識(shí)到韃靼蕎麥的藥用價(jià)值，在唐初著名醫(yī)學(xué)家孫思邈的巨著《備急千金要方》中就有：“蕎麥味酸、微寒、無毒”的記載。在我國(guó)的醫(yī)學(xué)名著《草本綱目》中對(duì)韃靼蕎麥的作用有如下記載：“苦蕎麥性味苦、平、寒，有益氣力、緩精神、利耳目、降氣、寬腸、健胃的作用”。世界各國(guó)的科學(xué)家從不同角度對(duì)這唯一藥食同源的植物進(jìn)行各方面研究。

蘆丁即維生素P，主要生理功能是強(qiáng)化血管，增加毛細(xì)血管壁通透性，降低血管脆性，促進(jìn)細(xì)胞增生和防止血細(xì)胞的凝結(jié)。蘆丁能夠降低血脂和膽固醇，對(duì)高血壓和心血管疾病有較好的預(yù)防和治療作用，并有控制和治療糖尿病、防止癌變、抗感染、抗過敏、利尿、鎮(zhèn)咳、平滑松弛肌肉等方面的功效，在食品和醫(yī)藥工業(yè)上有著廣泛的用途。韃靼蕎麥的蘆丁含量比甜蕎高13.5倍，維生素B2高3.16倍。所以對(duì)于韃靼蕎麥的研究顯得尤為重要。

由于韃靼蕎麥具有顯著的研究?jī)r(jià)值，目前研究重點(diǎn)主要在植物遺傳操作，基因轉(zhuǎn)化等方面，但是韃靼蕎麥的組織培養(yǎng)技術(shù)卻一直停滯不前，主要由于韃靼蕎麥分化難，愈傷組織易褐化，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等因素造成。這些不利因素使韃靼蕎麥研究嚴(yán)重滯后，所以，通過促進(jìn)不定芽的分化率，從而建立穩(wěn)定的植物高頻再生體系，對(duì)于韃靼蕎麥的深入研究具有積極作用。目前，韃靼蕎麥(F.tartaricum(L.)Gaerth)組織培養(yǎng)已有少量報(bào)道，李占旗和吳崇明等人通過下胚軸和子葉獲得了韃靼蕎麥(F.tartaricum(L.)Gaerth)的再生植株(西北植物學(xué)報(bào)，2006；應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2009)，而通過對(duì)愈傷組織進(jìn)行懸浮培養(yǎng)促進(jìn)韃靼蕎麥不定芽分化的研究國(guó)內(nèi)外未有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于，提供一種通過懸浮培養(yǎng)提高韃靼蕎麥不定芽分化率的方法，為韃靼蕎麥規(guī)模化快繁和遺傳操作研究奠定基礎(chǔ)。該方法以韃靼蕎麥7天齡無菌苗下胚軸為外植體，建立固體誘導(dǎo)愈傷-液體誘導(dǎo)分化-固體促進(jìn)生根的體系，同時(shí)調(diào)節(jié)誘導(dǎo)各階段的光照強(qiáng)度，可以防止韃靼蕎麥愈傷組織的褐化，并且極大的促進(jìn)芽的分化。

為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案得以實(shí)現(xiàn)：

一種通過懸浮培養(yǎng)提高韃靼蕎麥不定芽分化率的方法，其特征在于，按以下步驟進(jìn)行：

(1)外植體的獲得

將成熟的韃靼蕎麥種子在水中浸泡10分鐘后去皮，將剝好皮的種子在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％的酒精中表面消毒1min，再在濃度0.1％的升汞中滅菌15min，最后用無菌水漂洗四次；

滅菌后的種子接種到不含蔗糖的1/2MS(Murashige-Skoog)固體培養(yǎng)基上，在溫度為25℃±2℃和光強(qiáng)為2000lx條件下萌發(fā)。

(2)愈傷組織的誘導(dǎo)

將萌發(fā)7天齡的苦蕎無菌苗下胚軸剪為0.5cm長(zhǎng)的小段，接種在誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上，在溫度為25℃±2℃、光照培養(yǎng)條件為500-2000Lx的條件下培養(yǎng)15天；所述的誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基的組成為：在常規(guī)的MS培養(yǎng)基中加入質(zhì)量濃度為0.8％的瓊脂，質(zhì)量濃度為3％的蔗糖，1-2mg/L的2，4-D，0.1-1mg/L的6-BA，10mg/L的AgNO₃；

(3)不定芽的誘導(dǎo)