[發明專利]一種通過懸浮培養提高韃靼蕎麥不定芽分化率的方法

無效

• 申請號: 201110238818.3
• 申請日: 2011-08-19
• 公開（公告）號: CN102405833A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 黃萱;徐子勤
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種通過懸浮培養提高韃靼蕎麥不定芽分化率的方法，其特征在于，按以下步驟進行：

(1)外植體的獲得

將成熟的韃靼蕎麥種子在水中浸泡10分鐘后去皮，將剝好皮的種子在質量分數為70％的酒精中表面消毒1min，再在0.1％的升汞中滅菌15min，最后用無菌水漂洗四次；

將滅菌后的種子接種到不含蔗糖的1/2MS固體培養基上，在溫度為25℃±2℃和光強為2000lx條件下萌發；

(2)愈傷組織的誘導

將萌發7天齡的苦蕎無菌苗下胚軸剪為0.5cm長的小段，接種在誘導愈傷組織培養基上，在溫度為25℃±2℃、光照培養條件為500-2000Lx的條件下培養15天；所述的誘導愈傷組織培養基的組成為：在常規的MS培養基中加入質量濃度為0.8％的瓊脂，質量濃度為3％的蔗糖，1-2mg/L的2，4-D，0.1-1mg/L的6-BA，10mg/L的AgNO₃；

(3)不定芽的誘導

將誘導的愈傷組織轉移到液體MS分化培養液上，250ml三角瓶含有60ml液體MS分化培養液，20rpm，在溫度為25℃±2℃、光照強度為1000-2500Lx條件下，每天光照16h，進行誘導苗的分化；所述的液體MS分化培養液的組成為：在液體MS培養基中加入0.5-2mg/L的NAA，1-2mg/L的6-BA，0.1-1mg/L的TDZ，5mg/L的AgNO₃，0.1-0.3mg/L的水解酪蛋白，接種密度為40g/L，待2-3周愈傷組織出現芽點后，將帶有芽點的愈傷組織從液體MS分化培養基中取出，轉入固體MS分化培養基中繼續培養，其中，MS固體分化培養基成分與MS液體分化培養基成分相同，瓊脂質量濃度為0.8％；

(4)苗的生根

待不定芽長至2-3cm，將誘導得到的不定芽剪下，插入誘導生根培養基中進行培養，所述的誘導生根培養基的組成為：在常規的MS固體培養基中加入1mg/L的NAA，瓊脂0.8％，培養溫度為25℃±2℃、光強為2000lx、每天光照16h，培養2-3周后即可獲得大量組培苗。