[發明專利]利用鹿胎盤制備生物活性蛋白寡肽粉的方法

無效

• 申請號: 201110237523.4
• 申請日: 2011-08-18
• 公開（公告）號: CN102485903A
• 公開（公告）日: 2012-06-06
• 發明（設計）人: 董栗;劉春生;龐秀明
• 申請（專利權）人: 內蒙古健元鹿業有限責任公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K2/00;A61K38/01;A61K8/64;A61P1/14;A61P13/12;A61P39/06;A61Q1/00;A23L1/29
• 代理公司: 北京億騰知識產權代理事務所 11309
• 代理人: 陳霽

技術領域

本發明涉及制備一種生物活性蛋白寡肽粉的方法，特別涉及一種利用鹿胎盤制備生物活性蛋白寡肽粉的方法。

背景技術

目前已有人以鱈魚肉、鰱魚、大豆、動物皮等為原料，采用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶及胰蛋白酶等水解蛋白酶制備了生物活性寡肽。在動物原料中，水產生物較為多見，鹿源寡肽還未見報道，在寡肽的生物活性方面也多集中在清除自由基活性，ACE抑制活性寡肽還未見報道。

鹿胎盤有補腎益精、延緩衰老的作用。但由于鹿胎盤溫補作用顯著，主要適合于氣血不足，腎氣虧虛的人食用，而大部分健康人群都不能過多食用，因此，限制了鹿胎盤的開發利用。同時，在一些鹿業公司鹿胎盤用酶活性為資源也未能被充分利用，而造成資源浪費。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用鹿肉制備的生物活性蛋白寡肽及其制備方法。

為實現上述目的，本發明提供了一種利用鹿肉制備生物活性蛋白寡肽粉。

本發明還提供了一種利用鹿肉制備生物活性蛋白寡肽粉及其制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

a.鹿胎盤預處理：將鹿胎盤煮至所述鹿胎盤的蛋白變性；

b.蛋白酶水解：向變性的鹿胎盤中添加堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶，進行酶解反應；

c.分離純化：將所述酶解液除鹽、冷凍干燥所得到的淡黃色粉針狀細末即為所述生物活性蛋白寡肽粉。

本發明還提供了所述生物活性寡肽作為原料在醫藥、保健品、化妝品的應用。

由于本發明以生物活性豐富以鹿肉或鹿胎盤作為原料，具有補腎益精、延緩衰老的功效；同時，由于寡肽富有的各種生物活性，本發明的生物活性的蛋白寡肽同時還具有ACE抑制的補腎益精活性和基于清除自由基指標的抗衰老活性，將該生物活性寡肽作為原料應用于醫藥、保健品、化妝品領域，為有效利用鹿肉資源，提供一種開發途徑。

附圖說明

圖1為本發明實施例1的鹿胎盤寡肽四個批次的TLC圖譜。

圖2為用相似度評價軟件自動生成的本發明的鹿胎盤寡肽對照圖譜。

圖3為本發明實施例1的鹿胎盤寡肽的分子量分布。

圖4為本發明實施例1的鹿胎盤寡肽在分子量為500-2000的展開圖；

圖5為本發明實施例1的鹿胎盤寡肽濃度與ACE抑制活性關系曲線。

具體實施方式

下面通過附圖和實施例，對本發明的技術方案做進一步的詳細描述。

本發明是按以下技術方案實現的，其制備及質量檢測方法是：

a.鹿肉預處理：將鹿肉或者鹿胎盤中肉質部分，去除筋膜和血管，洗凈，反復凍融，絞碎。優選地，原料選自鹿胎盤；優選地，凍融三次以上；優選地，用95℃以上水煮15-30分鐘。

b.蛋白酶水解：將變性的鹿肉與的水均勻混合，添加的堿性蛋白酶和的木瓜蛋白酶，進行酶解反應，滅酶活，冷卻至常溫。優選地，堿性蛋白酶占鹿胎原料的0.8％-2％；木瓜蛋白酶占鹿胎原料的0.8％-2％，優選地，在55±5℃，pH7.5±0.5的條件下酶解反應3-5小時；優選地，95℃以上滅酶活15分鐘，冷卻至常溫；優選地，變性的鹿肉與1∶1的水的混合比例為1∶1，按重量計。

c.分離純化：離心去除不溶雜質后，將酶解液稀釋，分離，收集分子量≤5k的部分，將收集到的料液除鹽，收集除鹽后的濃縮液，旋轉蒸發除去大部分水后，冷凍干燥即獲得淡黃色粉針狀細末。優選地，采用8000rpm高速離心；優選地，將酶解液稀釋10倍以上，優選地，采用超濾膜分離，優選地，利用納濾除鹽。

d.薄層色譜檢測產品：薄層色譜條件為展開劑配方為正丁醇∶乙醇∶乙酸∶水＝4∶1∶1∶2，顯色劑配方為0.2％的茚三酮乙醇溶液，得到該工藝產品的5個主要特征點，為合格。

e.高效液相色譜檢測產品：高效液相條件為：Agilent?1100型高效液相色譜儀，T3色譜柱(4.6×10mm，3μm)，流動相為100％的超純水，流速0.6ml/min，選樣量10μl，檢測波長紫外215nm。用國家藥典委員會頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A》軟件制定出對照圖譜，與對照圖譜相似度大于90％的鹿胎盤寡肽為合格。

實施例1