[發(fā)明專利]同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110237497.5
• 申請日: 2011-08-18
• 公開（公告）號: CN102286067A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹大川;郭云珠;曹慧玲;張辰艷;馬曉亮;崔超
• 申請（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于包括下述步驟：

(a)將濃度為10-80mg/mL、體積為2-20μL或者1-6顆吸附-解吸附材料添加到蛋白質(zhì)結(jié)晶容器中擬結(jié)晶位置；對于密度大于蛋白質(zhì)溶液的吸附-解吸附材料的添加方法是在結(jié)晶孔板中擬結(jié)晶位置涂抹真空脂，用小鑷子將吸附-解吸附材料粘附在涂有真空酯的結(jié)晶孔板中擬結(jié)晶位置上；對于密度小于蛋白質(zhì)溶液的-解吸附吸附材料的添加方法是將吸附-解吸附材料直接添加到結(jié)晶孔板中擬結(jié)晶位置；或者將吸附-解吸附材料用酒精分散成溶液，用移液器添加至結(jié)晶孔板中擬結(jié)晶位置；

(b)將擬結(jié)晶的蛋白質(zhì)加入到緩沖液中，溶解，制成濃度＞0mg/mL，并且蛋白質(zhì)溶液的初始濃度是6-50mg/mL；

(c)將蛋白質(zhì)結(jié)晶試劑與蛋白質(zhì)溶液按照體積比為1∶0.1-4混合，配制出蛋白質(zhì)結(jié)晶溶液；

(d)將蛋白質(zhì)結(jié)晶溶液添加到蛋白質(zhì)結(jié)晶容器中擬結(jié)晶位置，與蛋白質(zhì)結(jié)晶容器中吸附-解吸附材料混合；

(e)將蛋白質(zhì)結(jié)晶溶液與蛋白質(zhì)結(jié)晶試劑置于同一密封空間但不互相接觸，形成一個穩(wěn)定的氣相擴散體系，在恒溫4-22℃溫度范圍內(nèi)靜置4-30天，實現(xiàn)結(jié)晶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述吸附-解吸附材料是具備吸附和釋放蛋白質(zhì)的材料，包括機納米材料、聚合物纖維或者聚合物吸附樹脂中的任一種；所述吸附-解吸附材料在周邊蛋白質(zhì)溶液濃度較高時，能夠吸附溶液中的蛋白質(zhì)；在周邊溶液濃度降低時，向周邊溶液釋放已吸附的蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述無機納米材料是粘土礦或者活性氧化鋁任一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述聚合物纖維是聚丙烯晴碳纖維。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述聚合物吸附樹脂包括α-甲基聚苯乙烯微球、磁性聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯/丙烯腈共聚微球、聚苯乙烯/二氧化鈦有機/無機復(fù)合微球或者烷基聚苯乙烯二乙烯基苯微球任一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：優(yōu)選的聚合物吸附樹脂是以苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、乙酸乙酯、氯乙烯、四氟乙烯或者丙烯腈的任一種單體的聚合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述緩沖液是pH＝4.60，0.25的M?Tris-HCL或者pH為7.00，0.025的M?HEPES-Na任一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選試劑盒是Crystal?Screen?HT、Crystal?Screen、Crystal?Screen2、Crystal?Screen?Cryo、Crystal?Screen?2?Cryo、SaltRx?HT、MembFac、Natrix?HTStura?Footprint、Clear?Strategy?Screen?I、Clear?Strategy?Screen?II、MorpHeus?HT、PACT?premier?HT或者MorpHeus?HT任一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提高蛋白質(zhì)結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量的方法，其特征在于：所述蛋白質(zhì)結(jié)晶容器是蛋白質(zhì)晶體坐滴板或懸滴板的任一種。