[發明專利]一種制備飼養層細胞的方法無效
| 申請號： | 201110237372.2 | 申請日： | 2011-08-18 |
| 公開（公告）號： | CN102277329A | 公開（公告）日： | 2011-12-14 |
| 發明（設計）人： | 喬杰;閆麗盈;于洋;李蓉;嚴杰;張妍;靳紅艷 | 申請（專利權）人： | 北京大學第三醫院 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12N5/073;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 飼養 細胞 方法 | ||
1.一種制備飼養層細胞的方法，包括如下步驟：
(1)將離體的成纖維細胞用10μg/ml絲裂霉素C處理，分別收集培養液上清和貼壁細胞；
(2)將離體的成纖維細胞用前一步驟收集的培養液上清處理，收集貼壁細胞；
在所述步驟(1)和所述步驟(2)之間還包括0至2次的如下步驟：將離體的成纖維細胞用前一步驟收集的培養液上清處理，分別收集培養液上清和貼壁細胞；
以上每一步驟得到的貼壁細胞均為飼養層細胞。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，所述成纖維細胞在含10μg/ml絲裂霉素C的完全培養基中進行所述處理。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)，和/或所述步驟(2)，和/或所述步驟(1)和所述步驟(2)之間的步驟中，所述處理的條件為37℃、5％CO2培養箱中培養2.5h。
4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：在進行所述方法前，所述成纖維細胞先進行傳代；用傳代后的成纖維細胞進行所述步驟(1)，和/或所述步驟(2)，和/或所述步驟(1)和所述步驟(2)之間的步驟。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述傳代的方法如下：將所述成纖維細胞進行消化后培育2-4天，然后進行(1∶3)-(1∶5)傳代。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述成纖維細胞進行所述消化后培育2-4天后達到的細胞密度為80-90％。
7.如權利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括將所述貼壁細胞進行消化的步驟；所述方法優選包括如下步驟：將每一步驟得到的所述貼壁細胞消化后立即于4℃放置30分鐘，然后置于-80℃。
8.如權利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述成纖維細胞為小鼠胚胎成纖維細胞；所述飼養層細胞為用于培養胚胎干細胞的飼養層細胞。
9.權利要求1至8中任一所述方法得到的飼養層細胞。
10.權利要求9所述飼養層細胞在培養胚胎干細胞中的應用。
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