[發明專利]小反芻獸疫病毒b-ELISA抗體檢測試劑盒及制備方法

有效

• 申請號: 201110236942.6
• 申請日: 2011-08-18
• 公開（公告）號: CN102419369A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 楊建民;艾軍;葉玲玲;楊俊興;祝賀;孫潔;周曉黎;花群義;董俊;徐維加;徐自忠;尹尚蓮;呂建強
• 申請（專利權）人: 云南出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/535
• 代理公司: 云南派特律師事務所 53110
• 代理人: 張怡;岳亞蘇

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是病毒抗體檢測領域。

背景技術

小反芻獸疫病毒（peste?des?petits?ruminants?virus，PPRV）對綿羊和山羊的發病率和死亡率分別高達100%和90%，在發展中國家引起嚴重的社會經濟問題，被世界動物衛生組織（OIE）列為重要動物疾病。該病首次報道在科特迪瓦，現發生在撒哈拉以南和赤道以北的多數非洲國家，中東到土耳其的幾乎全部國家，在印度、南亞、西亞也廣泛傳播。2007年7月，該疫病首次傳入我國西藏地區。?

小反芻獸疫病毒抗體檢測方法，世界動物衛生組織推薦使用的方法為病毒中和試驗(VN)和競爭ELISA?(c-ELISA)?，一般條件下能區分小反芻獸疫和牛瘟病毒血清抗體，且由于c-ELISA特異性和敏感性更高，且適合于檢測大量的樣品，時間周期相對較短，因此廣泛應用于小反芻獸疫病毒抗體檢測。

小反芻獸疫c-ELISA診斷試劑盒，國內尚未見商品化的相關產品，在國際上通用的為法國BIRAD實驗室研制的小反芻獸疫c-ELISA試劑盒（Libeau.et?al.,1995），該診斷試劑盒也是我國小反芻獸疫疫病的主要診斷試劑。參考文獻：Libeau?G,?Préhaud?C,Lancelot?R,et?al.Development?of?a?competitive?ELISA?for?detecting?antibodies?to?the?peste?des?petits?ruminants?virus?using?a?recombinant?nucleoprotein[J].Res?Vet?Sci,1995,58,50-55。

在應用法國BIRAD實驗室研制的小反芻獸疫c-ELISA診斷試劑盒在國內相應疫病的調查中，我們發現此試劑盒的購買每次均需要大批量的從國外訂購，無小包裝，經濟成本較高，其試劑盒中的底物液等均需要現配置，操作較繁瑣。

發明內容

本發明的目的在于提供一種針對核蛋白的特異性單抗而研制的抗體檢測試劑盒。

本發明的另一目的在于提供這種抗體檢測試劑盒的制備方法。

本發明所述的小反芻獸疫病毒b-ELISA抗體檢測試劑盒主要包括分別放置的小反芻獸疫核蛋白抗原和小反芻獸疫單克隆抗體；所述的小反芻獸疫核蛋白抗原是由昆蟲細胞表達的小反芻獸疫Nigeria75/1疫苗株核蛋白，核蛋白基因序列NCBI登錄號為：X74443.2，表達蛋白分子量約61.3?kDa，由1578bp?核酸組成，編碼526個氨基酸；所述的小反芻獸疫單克隆抗體是針對小反芻獸疫Nigeria75/1株核蛋白的特異性單克隆抗體，抗體免疫球蛋白重鏈和輕鏈分子量約55ku和26ku，染色體數目約99-104條，相對親和力指數為1.0?mol/L。

本發明所述的小反芻獸疫病毒b-ELISA抗體檢測試劑盒包括分別放置的小反芻獸疫核蛋白抗原、小反芻獸疫單克隆抗體、稀釋液、強陽性血清、弱陽性血清、陰性血清、HRP羊抗鼠二抗、20倍濃縮洗滌液、底物液、終止液和酶鏈免疫吸附板；所述的小反芻獸疫核蛋白抗原是由昆蟲細胞表達的小反芻獸疫Nigeria75/1疫苗株核蛋白，核蛋白基因序列NCBI登錄號為：X74443.2，表達蛋白分子量約61.3?kDa，由1578bp?核酸組成，編碼526個氨基酸；所述的小反芻獸疫單克隆抗體是針對小反芻獸疫Nigeria75/1株核蛋白的特異性單克隆抗體，抗體免疫球蛋白重鏈和輕鏈分子量約55ku和26ku，染色體數目約99-104條，相對親和力指數為1.0?mol/；所述的稀釋液配方為：NaCl?8g，KH₂PO_4??0.24g，Na₂HPO₄??1.44g，KCl??0.2g，牛血清白蛋白BSA?30?g，山羊PPRV陰性、Vero細胞抗體陽性血清10?mL，加蒸餾水至1000mL。

本發明所述的小反芻獸疫病毒b-ELISA抗體檢測試劑盒各組成部分的體積或數量如下：