[發(fā)明專利]一種NK和/或NKT細(xì)胞的培養(yǎng)方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110235506.7 | 申請日： | 2011-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN102676453A | 公開（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 馬潔;趙晨;趙平 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢 |
| 地址： | 100021 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 nk nkt 細(xì)胞 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種培養(yǎng)NK和/或NKT細(xì)胞的方法，包括如下步驟：
將離體的NK和/或NKT細(xì)胞接種到如下培養(yǎng)體系A(chǔ)中，培養(yǎng)，即得到增殖的NK和/或NKT細(xì)胞；
所述培養(yǎng)體系A(chǔ)為如下1)或2)：
1)所示培養(yǎng)體系A(chǔ)由抗CD3抗體、Retronectin、培養(yǎng)基和誘導(dǎo)因子組成；
2)所示培養(yǎng)體系A(chǔ)由抗CD3抗體、培養(yǎng)基和誘導(dǎo)因子組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：
所述抗CD3抗體與所述培養(yǎng)基的配比為5μg∶5ml；
所述Retronectin與所述培養(yǎng)基的配比為25μg∶5ml；
所述誘導(dǎo)因子為IL-2和IL-15；
所述IL-2在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度為800-1200IU/ml，所述IL-2在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度具體為1000IU/ml；
所述IL-15在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度為18ng/ml-22ng/ml，所述IL-15在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度具體為20ng/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
1)所示培養(yǎng)體系A(chǔ)中的所述抗CD3抗體和Retronectin由緩沖液A提供：
每2ml所述緩沖液A按照如下方法制備：將25μg?Retronectin、5μg抗CD3抗體和濃度為0.01M、PH值為7.2的PBS緩沖液混合，用所述PBS緩沖液補至2ml；
2)所示培養(yǎng)體系B中的所述抗CD3抗體由緩沖液B提供：
每2ml所述緩沖液B按照如下方法制備：將25μg?Retronectin和濃度為0.01M、PH值為7.2的PBS緩沖液混合，用所述PBS緩沖液補至2ml；
所述培養(yǎng)時間為70小時-74小時，所述培養(yǎng)時間具體為72小時，所述培養(yǎng)溫度為35℃-38℃，所述培養(yǎng)溫度具體為37℃，所述培養(yǎng)所需CO2的濃度為4.5％-5.5％(體積百分含量)，所述培養(yǎng)所需CO2的濃度具體為5％(體積百分含量)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
在所述培養(yǎng)步驟后，還包括如下步驟：
將所述培養(yǎng)得到的細(xì)胞移入不含有抗CD3抗體和Retronectin的培養(yǎng)體系B中繼續(xù)培養(yǎng)，得到增殖的NK和/或NKT細(xì)胞；
所述培養(yǎng)體系B和所述培養(yǎng)體系A(chǔ)的區(qū)別為不含有抗CD3抗體和Retronectin，其它組分和各組分濃度均相同。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：
所述緩沖液A、所述緩沖液B和所述誘導(dǎo)因子均為獨立包裝。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述培養(yǎng)基為含10％(體積百分含量)離體血漿的T503培養(yǎng)基；
所述抗CD3抗體為單抗或者多抗；
所述抗CD3抗體具體為Anti-CD3；
所述離體的血漿與所述離體的NK和/或NKT細(xì)胞來源于同一物種；
所述物種具體為人或動物。
7.一種用于培養(yǎng)NK和/或NKT細(xì)胞的培養(yǎng)體系，所述培養(yǎng)體系A(chǔ)為如下1)或2)：
1)所示培養(yǎng)體系A(chǔ)由抗CD3抗體、Retronectin、培養(yǎng)基和誘導(dǎo)因子組成；
2)所示培養(yǎng)體系A(chǔ)由抗CD3抗體、培養(yǎng)基和誘導(dǎo)因子組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)體系，其特征在于：
所述抗CD3抗體與所述培養(yǎng)基的配比為5μg∶5ml；
所述Retronectin與所述培養(yǎng)基的配比為25μg∶5ml；
所述誘導(dǎo)因子為IL-2和IL-15；
所述IL-2在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度為800-1200IU/ml，所述IL-2在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度具體為1000IU/ml；
所述IL-15在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度為18ng/ml-22ng/ml，所述IL-15在所述培養(yǎng)體系A(chǔ)中的濃度具體為20ng/ml。
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