[發明專利]一種采用溫度誘導生產重組人表皮生長因子的方法

有效

• 申請號: 201110235048.7
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102952817A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 錢悅;甘人寶;侯永泰;吳劍英;張倩;周慶瑋;馮寶山;丁紅珍;杜鵬
• 申請（專利權）人: 上海昊海生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種用于重組表達人表皮生長因子的構建物，其從5’至3’端依次包括以下操作性連接的元件：

噬菌體P_L啟動子，OmpA信號肽基因，人表皮生長因子基因。

2.如權利要求1所述的，其特征在于，所述的噬菌體P_L啟動子來源于pBLGlu2；和/或

所述的OmpA信號肽基因和人表皮生長因子基因的序列如SEQ?ID?NO：1所示。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的構建物是表達載體。

4.一種基因工程菌，其特征在于，其包含權利要求1-3任一所述的構建物。

5.一種重組表達人表皮生長因子的方法，包括：培養權利要求4所述的基因工程菌，從而表達人表皮生長因子。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，先在30℃±2℃繁殖基因工程菌至菌體OD₆₆₀值超過30；之后升高培養溫度至38.0±0.5℃，使基因工程菌中所含噬菌體P_L啟動子啟動，誘導分泌表達人表皮生長因子。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，誘導表達12±2小時。

8.如權利要求5所述的方法，其特征在于，發酵培養基配方為：

酵母抽提物20±5g/L，蛋白胨，20±5g/L，氯化鈉1±0.2g/L，無水硫酸鎂1±0.2g/L，氯化銨2±0.4g/L，硫酸銨2±0.4g/L，磷酸二氫鈉·3H₂O?0.4125±0.1g/L，磷酸氫二鈉·12H₂O??0.675±0.2g/L，氯化鈣0.02±0.005g/L，1％維生素B10.2±0.05ml/L，葡萄糖10±2g/L；或

補料培養基配方為：葡萄糖650±50g/L，水解酪蛋白100±10g/L。

9.如權利要求5所述的方法，其特征在于，在發酵前，進行種子培養，種子培養的條件是30℃±2℃培養12±2小時。

10.如權利要求5所述的方法，其特征在于，培養7±1小時后開始補料，第1小時補料50ml，第2小時補料70ml，第3小時補料100ml，第4小時補料150ml，第5小時補料220ml；之后開始誘導表達，同時恒速補料，補料速度240ml/小時。