[發(fā)明專利]一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110233989.7
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102277410A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高建;陸金春;陳曉慧
• 申請（專利權(quán)）人: 南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種體外診斷用試劑盒及其應(yīng)用，具體地說是一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

附睪是精子輸送、成熟、貯存的場所，附睪分泌功能的下降會對精子的活性和功能產(chǎn)生不良影響。目前，用以檢測附睪分泌功能的指標有甘油磷酸膽堿、左旋肉堿以及α-糖苷酶(α-糖苷酶)。研究表明，與左旋肉堿和甘油磷酸膽堿相比，在輸精管結(jié)扎和確診為生殖道梗阻的患者中，α-糖苷酶對附睪分泌功能的檢測更加特異和靈敏，被認為是附睪分泌功能的標志酶和特異性酶。在輸精管結(jié)扎、梗阻、切除或先天性精囊缺如、發(fā)良不良的患者中，α-糖苷酶活性顯著降低；另外，在不完全射精或射精過頻以及附睪炎、附睪分泌功能紊亂的患者中，該酶活性也呈現(xiàn)下降現(xiàn)象。相反，α-糖苷酶活性越高，則精子與透明帶結(jié)合能力越強，宮腔內(nèi)人工授精成功的可能性越大。精漿α-糖苷酶結(jié)合其它指標如精漿果糖、精子染色等的檢測，還可實現(xiàn)梗阻性無精子癥患者的梗阻部位定位，分泌型或排泄型無精癥的鑒別、附睪水平上局部梗阻的判斷等，被認為是一種快速、敏感、無創(chuàng)傷性的檢測方法。

目前，精漿α-糖苷酶(α-GLUC)活性定量檢測的方法主要是化學比色法，該法多為手工或半自動操作，加樣程序多，操作步驟復雜，試劑和樣品混勻一定的時間后，通過分光光度計逐一比色測定，再根據(jù)公式計算出結(jié)果，不但耗時耗力，而且人為誤差也比較大。

現(xiàn)在，臨床生化檢驗基本上都實現(xiàn)了自動化分析。全自動生化儀就是將原始手工操作過程中的取樣、混勻、溫育、檢測、結(jié)果計算、判斷、顯示和打印結(jié)果及清洗等步驟全部或者部分自動運行，由于其測量速度快、準確性高、消耗試劑量小，現(xiàn)已在各級醫(yī)院、防疫站、計劃生育服務(wù)站等得到了廣泛應(yīng)用，配合使用可大大提高常規(guī)生化檢驗的效率和收益。遺憾的是，截止到目前，無論是國外還是國內(nèi)，對于精漿α-糖苷酶項目的檢測，除了早期的科研成果外，尚沒有一種可與全自動生化儀相配套的、商品化的檢測試劑盒問世，因此，建立一種與全自動生化儀相配套使用的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及檢測方法就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，填補市場上的空缺，提供一種與全自動生化儀相配套使用的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒。

本發(fā)明的另一目的在于提供所述精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α-糖苷酶活性中的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，其中R1試劑包括以下含量的組份：90-110mmol/L?pH6.8-7.0緩沖液、1.0-3.0U/L葡萄糖氧化酶、1.0-2.5U/L過氧化物酶和0.01-0.1％防腐劑；R2試劑包括以下含量的組份：90-110mmol/LpH6.8-7.0緩沖液、100-115mmol/L生色劑、70-100mmol/L麥芽糖、0.2-1.0mmol/L?4-氨基安替比林和0.01-0.1％防腐劑；

其中，所述生色劑為苯酚、2，4-二氯酚、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉或4-氨基-3-甲基苯甲酸；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液；所述防腐劑為硫柳汞、慶大霉素或ProClin系列防腐劑中任意一種。

所述的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α-糖苷酶活性中的應(yīng)用。

其中，利用精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒監(jiān)測檢測精漿α-糖苷酶活性，包括如下步驟：

1)樣品制備：新鮮精液液化后通過3000～5000rpm離心10～20min，所獲得的上清液即是；

2)在全自動生化儀上輸入基本參數(shù)如下：

檢測項目：α-GLUC；

樣品試劑比：1∶60；

試劑比例：R1∶R2＝1∶4；

檢測方法：速率法；

定標方法：因子法；

主波長：500-520nm；

輔波長：600-700nm；

反應(yīng)方向：上升；

反應(yīng)時間：140-270秒；

檢測時間：90-120秒；

3)定標操作：

采用因子法定標，直接輸入理論因子F值即可；

F值的計算公式如下：

其中，10³為mmol至μmol的轉(zhuǎn)化系數(shù)；Vt為反應(yīng)液總體積；ε為醌亞胺的理論摩爾消光系數(shù)即13.78×10³；L為比色皿光徑(1cm)；Vs為樣品體積；

4)樣本檢測：