[發明專利]一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒及應用

無效

• 申請號: 201110233989.7
• 申請日: 2011-08-16
• 公開（公告）號: CN102277410A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 高建;陸金春;陳曉慧
• 申請（專利權）人: 南京欣迪生物藥業工程有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉玲

1.一種精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒，其特征在于，包括R1試劑和R2試劑，其中R1試劑包括以下含量的組份：90-110mmol/L?pH6.8-7.0緩沖液、1.0-3.0U/L葡萄糖氧化酶、1.0-2.5U/L過氧化物酶和0.01-0.1％防腐劑；R2試劑包括以下含量的組份：90-110mmol/L?pH6.8-7.0緩沖液、100-115mmol/L生色劑、70-100mmol/L麥芽糖、0.2-1.0mmol/L?4-氨基安替比林和0.01-0.1％防腐劑；

其中，所述生色劑為苯酚、2，4-二氯酚、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉或4-氨基-3-甲基苯甲酸；

所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris緩沖液；

所述防腐劑為硫柳汞、慶大霉素或ProClin系列防腐劑中任意一種。

2.權利要求1所述的精漿α-糖苷酶活性定量檢測試劑盒在檢測精漿α-糖苷酶活性中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于包括如下步驟：

1)樣品制備：新鮮精液液化后通過3000～5000rpm離心10～20min，所獲得的上清液即是；

2)在全自動生化儀上輸入基本參數如下：

檢測項目：α-GLUC；

樣品試劑比：1∶60；

試劑比例：R1∶R2＝1∶4；

檢測方法：速率法；

定標方法：因子法；

主波長：500-520nm；

輔波長：600-700nm；

反應方向：上升；

反應時間：140-270秒；

檢測時間：90-120秒；

3)定標操作：

采用因子法定標，直接輸入理論因子F值即可；

F值的計算公式如下：

其中，10³為mmol至μmol的轉化系數；Vt為反應液總體積；ε為醌亞胺的理論摩爾消光系數即13.78×10³；L為比色皿光徑(1cm)；Vs為樣品體積；

4)樣本檢測：

將制備好的精漿樣本和R1試劑、R2試劑放在全自動生化儀的相應位置上，全自動生化儀根據理論因子得出樣本中α-糖苷酶的活性：

酶活性單位U定義：在上述反應條件下，每分鐘催化1μmol麥芽糖分解所需的酶量為一個酶活性單位；

精漿中α-糖苷酶活性(U/L)＝ΔA/min×F

其中，ΔA/min即每分鐘吸光度的變化率，F值為已知。