[發明專利]抗生素Pseudonocardian A和B及其制備方法和在制備抗菌、抗腫瘤藥物中的應用

有效

• 申請號: 201110231993.X
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102351859A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 張長生;李蘇梅;田新朋;張文軍;張海波;張光濤;張偲;鞠建華
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C07D471/16
• 分類號: C07D471/16;A61K31/4745;A61P31/04;A61P35/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;余炳和

技術領域：

本發明屬于工業微生物領域，具體涉及新的抗生素PseudonocardianA和PseudonocardianB及其制備方法和在制備抗菌、抗腫瘤藥物中的應用。?

背景技術：

Deoxynyboquinone(DNQ)是一個已經人工合成的化合物，其結構如式(I)所示，該化合物具有顯著細胞毒活性，在以產生活性氧自由基(ROS)為抗性機理的抗腫瘤藥物中，該化合物表現出優異的特征-在缺氧條件下仍顯示出較強活性，成藥潛力巨大。與之結構相近的化合物SCH?538415活性較之弱10倍(Bair，J.S.；Palchaudhuri，R.；Hergenrother，P.?J.，Chemistry?and?biology?of?deoxynyboquinone，a?potent?inducer?of?cancer?cell?death.J?Am?Chem?Soc2010，132，(15)，5469-78.)。?

式(I)?

發明內容：

本發明的第一個目的是提供兩種新的具有抗菌和細胞毒活性的化合物Pseudonocardian?A和Pseudonocardian?B。?

本發明的兩種新的抗生素Pseudonocardian?A和Pseudonocardian?B，其結構如式(II)所示：?

式(II)?

其中當R＝H時為Pseudonocardian?A，當R＝CH₃時為Pseudonocardian?B。?

本發明的第二個目的是提供一種PseudonocardianA和Pseudonocardian?B的制備方法。?

本發明的Pseudonocardian?A和Pseudonocardian?B是從假諾卡氏菌Pseudonocardia?spSCSIO?01299的發酵培養物中制備分離得到的。?

本發明優選通過以下方法從假諾卡氏菌Pseudonocardia?sp.SCSIO?01299的發酵培養物中制備得到PseudonocardianA和Pseudonocardian?B，具體步驟如下：?

a)制備假諾卡氏菌SCSIO?01299的發酵培養物，將該發酵培養物的發酵液和菌絲體分離開，發酵液經丁酮萃取，丁酮層經蒸餾濃縮后得到浸膏A；菌絲體先用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用丁酮萃取，丁酮層經蒸餾濃縮后得到浸膏B；?

b)將浸膏A和浸膏B合并的粗提物經硅膠柱層析，用氯仿/甲醇作為洗脫劑，從體積比100∶0～0∶100進行梯度洗脫，收集氯仿/甲醇體積比50∶1梯度洗脫下來的餾分Fr.1，再過LH-20凝膠柱，以氯仿/甲醇體積比1∶1作為流動相洗脫，后經過硅膠柱層析，用氯仿/甲醇體積比為20∶1作為流動相洗脫，再經ODS反相中壓液相色譜(YMC*GELODS-A球型填料，120A孔徑，50um粒徑，40×2.5cm?I.D.)，流速為15ml/min，以體積分數從0％～55％的甲醇/水梯度洗脫160min，收集體積分數40～45％的甲醇/水梯度洗脫下來的餾分，得到化合物Pseudonocardian?A，收集體積分數50～55％的甲醇/?水梯度洗脫下來的餾分，得到化合物Pseudonocardian?B。?

所述的a)步驟的制備假諾卡氏菌SCSIO?01299的發酵培養物優選通過以下方法制備：將活化的假諾卡氏菌SCSIO?01299接入種子培養基中，28℃，200rpm，培養48h制得種子液，將種子液以10％的接種量接入到發酵培養基中，28℃，200rpm，振蕩培養120h，而制得發酵培養物，所述的種子培養基和發酵培養基的配方都為每升培養基中含有：淀粉15g，大豆粉5g，蛋白胨15g，甘油15g，CaCO₃2g，粗海鹽30g，余量為水，pH?7.4。經本方法制備的假諾卡氏菌SCSIO?01299的發酵培養物中PseudonocardianA和B的含量比較高。?

本發明通過實驗發現，Pseudonocardian?A和B對金黃色葡萄球菌Staphylococcus?aureusATCC?29213，蘇云金芽孢桿菌Bacillus?thuringensis和糞腸球菌Enterococcus?faecalis?ATCC29212具有抗菌活力，MIC值在2～4μg/ml之間，由此可見化合物Pseudonocardian?A和B具有較好抑菌活性，有望研發成為抗菌新藥。?