[發明專利]IBDV無血清微載體懸浮培養增殖的方法無效
| 申請號： | 201110231805.3 | 申請日： | 2011-08-15 |
| 公開（公告）號： | CN102268411A | 公開（公告）日： | 2011-12-07 |
| 發明（設計）人： | 吳培培;馮磊;王偉峰;侯繼波 | 申請（專利權）人： | 江蘇省農業科學院 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 南京眾聯專利代理有限公司 32206 | 代理人： | 王荷英 |
| 地址： | 210014 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | ibdv 血清 載體 懸浮 培養 增殖 方法 | ||
【權利要求書】：
1.IBDV無血清微載體懸浮培養增殖的方法，其特征在于，包括下列步驟：
1）Vero細胞的無血清培養的馴化：逐步降低Vero細胞培養基中的血清濃度，在15代之內將血清降低到0.2%；將低血清培養的細胞轉到無血清培養基中培養，待細胞適應后，擴增細胞作為種子庫細胞；
2）IBDV病毒增殖：將馴化的細胞接種到含0.25%的乳清蛋白水解物的無血清培養基，待細胞粘附到微載體并開始生長時接種IBDV病毒，90h收獲病毒。
2.根據權利要求1所述的IBDV無血清微載體懸浮培養增殖的方法，其特征在于，所說的步驟2）中IBDV病毒增殖具體包括以下步驟：
1）將無血清培養的Vero細胞消化后離心，按照3~4×105cell/mL的初始密度重懸到病毒維持液中；病毒維持液成分為含0.25%的乳清蛋白水解物的無血清培養基IVT；細胞初始培養條件為pH值7.1、懸浮培養攪拌速度35rpm、溶氧30%、溫度37℃；
2）待細胞在微載體上貼附后，接種IBDV病毒，接種病毒時的微載體的粘球率達到40~50%；病毒接種量：病毒以0.01~0.2的感染復數接種；IBDV病毒增殖期間，維持條件：pH值7.2、懸浮培養攪拌速度35rpm、溶氧30%、溫度37℃，接種90h收獲病毒。
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