[發明專利]抗菌肽LF-TH及其大腸桿菌重組制備方法

無效

• 申請號: 201110231087.X
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102276729A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 馮興軍;盛尊來;馬德星;郭佳音;李靜
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.抗菌肽LF-TH，其特征在于抗菌肽LF-TH的氨基酸序列包括33個氨基酸，其氨基酸序列如下：PheLysCysArgArgTrpGlnTrpArgTrpLysLysLeuGlyAlaLysProValProIleIleTyrCysAsnArgArgThrGlyLysCysGlnArgMet，其編碼基因序列如SEQ?IDNo.2所示。

2.大腸桿菌重組制備如權利要求1所述抗菌肽LF-TH的方法，其特征在于抗菌肽LF-TH的大腸桿菌重組制備方法按以下步驟進行：

一、選取LfcinB的第1～15位氨基酸序列Lfcin?B(1～15)，其中的第十位氨基酸由Met替換為Trp，選取Thanatin的第4～21位氨基酸序列Th(4～21)，將Lfcin?B(1～15)與Th(4～21)連接，設計抗菌肽LF-TH，然后根據大腸桿菌密碼子偏愛性設計抗菌肽LF-TH的編碼基因；

二、將抗菌肽LF-TH的編碼基因與質粒pET-32a(+)連接，構建重組大腸桿菌表達載體，轉化宿主細胞E.coli?BL21(DE3)，IPTG誘導表達后，離心收集菌體，超聲波裂解、離心收集上清液，利用Ni-NTA層析柱、蛋白純化儀獲得目的重組融合蛋白，然后腸激酶裂解目的重組融合蛋白釋放抗菌肽LF-TH，經RP-HPLC純化后獲得抗菌肽LF-TH，即完成抗菌肽LF-TH的大腸桿菌重組制備；

其中步驟一中抗菌肽LF-TH的氨基酸序列包括33個氨基酸，其氨基酸序列如下：PheLysCysArgArgTrpGlnTrpArgTrpLysLysLeuGlyAlaLysProValProIleIleTyrCysAsnArgArgThrGlyLysCysGlnArgMet；

步驟一中抗菌肽LF-TH的編碼基因序列如SEQ?ID?No.2所示。