[發明專利]一種快速獲得辣椒轉基因植株的方法

無效

• 申請號: 201110231054.5
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102286526A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 刁衛平;王述彬;劉金兵;潘寶貴;戈偉
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

1.一種快速獲得辣椒轉基因植株的方法，其特征在于包含下列步驟：

1）取樣：在果實采摘期晴天從健壯植株上取自然成熟的紅果；

2）農桿菌活化和侵染：將含有目的基因的農桿菌LBA4404接種于含有45mg/L卡那霉素及45mg/L利福平的YEB的固體培養基上，27℃暗培養2天后，挑單菌落接種至含有45mg/L卡那霉素及45mg/L利福平的YEB液體培養基中，27℃，250rpm振蕩培養至OD₆₀₀值為0.4~06，將菌液轉入50mL離心管中，4000rpm離心菌液后，用等體積的無菌水懸浮菌液后備用；取1）中果實的種子，取出未成熟胚轉移至已準備好的農桿菌菌液中，浸沒5分鐘；

3）再生培養基和篩選培養基制備：再生和篩選培養基所用基本培養基為MS培養基，所用碳源為蔗糖，凝固劑為瓊脂；再生培養基的組成成分為MS+1~5mg/L?6-BA+3%wt蔗糖+0.8%wt瓊脂，篩選培養基的組成成分為MS+1~5mg/L?6-BA?+3%wt蔗糖+0.8%wt瓊脂+60mg/L卡那霉素；

4）未成熟胚接種和培養：將2）中侵染的未成熟胚在滅菌濾紙上瀝干菌液后，置于3）中再生培養基上，在27℃黑暗條件下培養后用無菌水沖洗外植體，轉移到篩選培養基上黑暗培養，然后于光照度2000lx、光照時間12h、室溫27℃下繼續培養，每三角瓶放30個未成熟胚；

5）不定芽形成和植株再生：接種后四周形成完整植株。

2.根據權利要求1所述的獲取辣椒轉基因植株的方法，其特征在于再生培養基和篩選培養基制備過程中，再生和篩選培養基組成中BA的濃度為2mg/L?。

3.根據權利要求1所述的獲取辣椒轉基因植株的方法，其特征在于未成熟胚接種和培養過程中，將2）中侵染的未成熟胚在滅菌濾紙上瀝干菌液后，置于3）中再生培養基上，先在27℃黑暗條件下培養1~5天后用無菌水沖洗外植體，轉移到篩選培養基上黑暗培養5~10天。