[發明專利]一種AFP-IgM檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201110231053.0
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102435733A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 徐斌;蔣敬庭;吳昌平;陸明洋
• 申請（專利權）人: 徐斌;蔣敬庭;吳昌平;陸明洋
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京市惠誠律師事務所 11353
• 代理人: 王美華

技術領域

本發明涉及一種AFP-IgM檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

肝細胞癌(Hepatocellular?carcinoma，HCC)是常見的惡性腫瘤之一，每年在世界范圍內約有100萬新發的病例。其主要誘因為乙型(中國與東南亞地區)和丙型(歐洲)肝炎病毒，早期缺乏典型的臨床表現、惡性程度高，難以早期診斷，且預后較差。

甲胎蛋白(AFP)在肝癌病人體內以兩種形式存在：即游離AFP(fAFP)和循環IgM復合型AFP(AFP-IgM?IC)。游離AFP又根據對植物凝集素(lectin)親和力的不同分為：AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3三個亞型，其中AFP-L3可作為衡量肝癌細胞惡性程度的一個標志物。AFP作為診斷HCC的首選腫瘤標志物，在肝癌的診斷方面占據著主要的地位，自應用于臨床以來使HCC診斷的準確性得到較大的提高，文獻報道其敏感性為41％～65％，但也易受如慢性肝炎、肝硬化與妊娠等其他因素影響。對于早期HCC的診斷，AFP假陰性率可達40％以上，進展期AFP的假陰性率為15％～20％，如何提高肝癌臨床檢出率是提高其生存率的關鍵因素。

AFP-IgM復合物是近年發現的新型肝癌標志物，AFP-IgM與AFP之間存在很好的互補性。游離AFP和循環IgM復合型AFP不會發生交迭，AFP-IgM是一種補充血清標志物，兩類標志物的聯合檢測有助于肝癌的診斷。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提高肝癌檢出率。為此本發明提供了一種AFP-IgM檢測試劑盒及檢測方法，使用該試劑盒同時聯合現有AFP檢測技術能提高肝癌診斷準確度。

本發明提供了一種檢測患者體內AFP-IgM含量的試劑盒，包括下列試劑：作為標準品的人免疫球蛋白IgM、作為標準品包被抗體的抗IgM抗體、作為檢測樣品包被抗體的抗AFP抗體、作為酶標記檢測抗體的抗IgM辣根過氧化物酶標記物(IgM-HRP)、作為顯色劑的四甲基聯苯胺溶液(TMB)、作為終止液的2M?H₂SO₄溶液、包被緩沖液、洗滌緩沖液、稀釋緩沖液。

作為優選，標準品包被抗體IgM抗體為羊抗人IgM多克隆抗體，0.2μg/ml，0.3ml。

作為優選，檢測樣品包被抗體抗AFP抗體為鼠抗人AFP單克隆抗體，0.2μg/ml，0.3ml。

作為優選，抗IgM辣根過氧化物酶標記物為兔抗人辣根過氧化物酶標記物，0.5mg/L，0.1ml。

作為優選，包被緩沖液為PH9.6?0.05M碳酸鹽緩沖液。該緩沖液可由Na₂CO₃?1.59克NaHCO₃2.93克，加蒸餾水至1000ml，調PH至9.6制得。

作為優選，洗滌緩沖液為PH7.40.15M磷酸鹽緩沖溶液。該溶液可由KH₂PO₄?0.2克、Na₂HPO₄·12H₂O?2.9克、NaCl?8.0克、KCl?0.2克、0.05％Tween-20?0.5ml、加蒸餾水至1000ml，調PH至7.4制得。

作為優選，稀釋緩沖液為牛血清白蛋白(BSA)與洗滌緩沖溶液配成質量分數0.1％(g/ml)使用或以羊血清、兔血清血清與洗滌緩沖溶液配成質量分數5～10％(g/ml)使用。

作為優選，四甲基聯苯胺溶液可由2mg/ml四甲基聯苯胺無水乙醇溶液0.5ml、PH5.0底物緩沖液10ml、0.75％H₂O₂?32μl制得，其中PH5.0底物緩沖液可由0.2M?Na₂HPO₄25.7ml、0.1M檸檬酸24.3ml，加蒸餾水50ml制得。

本發明提供了一種使用上述試劑盒檢測患者體內體內AFP-IgM含量的方法，具體方法是：

第一步：包被

(2)標準品孔用IgM抗體包被于酶標板孔內；

(2)檢測孔用AFP抗體包被于酶標板孔內；

第二步：洗滌酶標板孔，移去包被液；