[發(fā)明專(zhuān)利]一種刺參致病菌的分離和鑒定方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110230345.2 | 申請(qǐng)日： | 2011-08-11 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102296038A | 公開(kāi)（公告）日： | 2011-12-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 金禮吉;譚德猛;徐永平;李曉宇 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 大連理工大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 大連理工大學(xué)專(zhuān)利中心 21200 | 代理人： | 梅洪玉 |
| 地址： | 116100*** | 國(guó)省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 刺參 致病菌 分離 鑒定 方法 | ||
1.一種刺參致病菌的分離和鑒定方法，其特征在于如下步驟：
A、標(biāo)樣選擇：選取刺參腐皮組織，在發(fā)病處切取1cm×1cm×1cm組織樣品；
B、組織樣品消毒：將組織樣品經(jīng)用75％酒精消毒60-90秒后，用滅菌海水沖洗，再用無(wú)菌PBS沖洗2-4次，組織勻漿，劃線于固體瓊脂培養(yǎng)基；
C、細(xì)菌的獲得：將培養(yǎng)皿上長(zhǎng)出的菌落再次采用平板劃線分離法進(jìn)行分離，24-28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72h后，挑選單菌落，然后將細(xì)菌純培養(yǎng)保存；
D、刺參腐皮綜合癥致病菌的篩選：將獲得的純培養(yǎng)細(xì)菌接種到TCBS選擇性培養(yǎng)基上，24-28℃培養(yǎng)48-72h后，篩選半透明、淡黃色的單個(gè)菌落；
E、刺參回接感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證篩選菌落的致病性，分別通過(guò)浸泡和體腔注射實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察細(xì)菌致病性；
F、掃描電鏡觀察致病菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)；
G、通過(guò)16s?rDNA?PCR分子生物學(xué)方法對(duì)致病性單菌落進(jìn)行鑒定。
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