[發(fā)明專利]香草醛-硫酸比色法測定光甘草定含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110230297.7
• 申請日: 2011-08-12
• 公開（公告）號: CN102384907A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樊金玲;張麥茹;朱文學(xué);李欣;唐浩國
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 洛陽市凱旋專利事務(wù)所 41112
• 代理人: 符繼超

1.一種香草醛-硫酸比色法測定光甘草定含量的方法，該方法主要涉及到：光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品純度HPLC≥98%，無水甲醇，質(zhì)量百分比濃度是98%的硫酸，香草醛，恒溫水浴鍋，比色皿，紫外可見分光光度計；該方法通過B環(huán)具有間苯二酚結(jié)構(gòu)且C環(huán)C₂、C₃是單鍵的光甘草定與香草醛試劑發(fā)生反應(yīng)并在質(zhì)量百分比濃度是98%的硫酸酸性條件下使反應(yīng)液顯色，再利用紫外可見分光光度計測定該顯色液在其最大吸收波長534nm下的吸光度值，從而完成顯色液吸光度值信息的采集過程：在所述酸性條件下，顯色液的顏色深淺與光甘草定的含量呈顯著線性正相關(guān)關(guān)系，符合朗伯-比爾定律，從而為光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液-平均吸光度值的線性回歸方程建立奠定了基礎(chǔ)，所述線性回歸方程為以后待測光甘草定含量的測定提供了定量標(biāo)準(zhǔn)；其特征是：

所述顯色液吸光度值信息的采集過程如下：

①配制濃度為20?mg/mL?的香草醛甲醇溶液

用燒杯稱取2.0g的香草醛，向燒杯中加入少量無水甲醇以溶解香草醛，將溶解后的香草醛甲醇溶液轉(zhuǎn)移到100?mL的第一容量瓶中，再用少量無水甲醇潤洗燒杯2-3次，并將潤洗后的香草醛甲醇溶液也轉(zhuǎn)移到第一容量瓶中，再向第一容量瓶中加入無水甲醇溶液至100?mL刻度為止，搖勻后得到濃度為20?mg/mL的香草醛甲醇溶液；

②配制體積百分比濃度為30%的硫酸甲醇溶液

用移液管準(zhǔn)確量取30?mL質(zhì)量百分比濃度是98%的硫酸并置于100?mL的第二容量瓶中，再向第二容量瓶中加入70?mL的無水甲醇，搖勻后得到體積百分比濃度為30%的硫酸甲醇溶液；

③配制濃度為0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)溶液

用燒杯稱取12.5?mg光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品，向燒杯中加入少量無水甲醇以溶解光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品，將溶解后光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品甲醇溶液置于25mL的第三容量瓶中，再用少量無水甲醇潤洗燒杯2-3次，并將潤洗后光甘草定的標(biāo)準(zhǔn)品甲醇溶液也轉(zhuǎn)移到第三容量瓶中，再向第三容量瓶中加入無水甲醇溶液至25?mL刻度為止，搖勻后得到濃度為0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)溶液；

④配制一十四份濃度范圍在0.01～0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液

分別吸取③中光甘草定標(biāo)準(zhǔn)溶液一十四份，所述一十四份0.5?mg/mL光甘草定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸取量依次為0.1?mL、0.3?mL、0.5?mL、0.7?mL、0.9?mL、1.1?mL、1.3?mL、1.4?mL、2.0?mL、2.6?mL、3.2?mL、3.8?mL、4.4?mL和5.0?mL，并分別置于一十四個5?mL容量瓶中，再向一十四個5?mL容量瓶中依次加入無水甲醇至5?mL刻度為止，搖勻后得到一十四份濃度依次為0.01?mg/mL、0.03?mg/mL、0.05?mg/mL、0.07?mg/mL、0.09?mg/mL、0.11?mg/mL、0.13?mg/mL、0.14?mg/mL、0.2?mg/mL、0.26?mg/mL、0.32?mg/mL、0.38?mg/mL、0.44?mg/mL和0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液，或簡稱為一十四份濃度范圍在0.01～0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液；

⑤采集吸光度值

從上述④中得到的一十四份濃度范圍在0.01～0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液中各吸取0.5?mL并分別加入到一十四個10?mL的具塞試管中，然后對所述一十四個10?mL的具塞試管分別加入2.5?mL上述①中配制的濃度為20?mg/mL?的香草醛甲醇溶液和2.5?mL?上述②中配制的體積百分比濃度為30%的硫酸甲醇溶液，然后對所述一十四個10?mL的具塞試管進(jìn)行封蓋并搖晃混勻后置于20?℃水浴中保溫20?min后取出，每個具塞試管得到5.5?mL的澄清顯色液，共得到一十四份所述顯色液；從每個具塞試管中提取小于1∕3的所述顯色液并置于比色皿中，利用紫外可見分光光度計采集所述顯色液的吸光度值信息，這樣在使用同一比色皿情況下得到一十四份所述顯色液的一十四個不同數(shù)值的吸光度值信息，這一十四個不同數(shù)值的吸光度值信息稱為一組，在相同條件下共做三組平行試驗以獲取三組不同數(shù)值的吸光度值信息；將三組中相同濃度所述顯色液所采集的三個吸光度值進(jìn)行算術(shù)平均，即得到三組相同濃度所述顯色液的平均吸光度值，按此方式能夠得到三組中其它濃度所述顯色溶液的平均吸光度值，共得到一十四個平均吸光度值，所述一十四個平均吸光度值與上述④中得到的一十四份濃度范圍在0.01～0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液相對應(yīng)；

所述光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液-平均吸光度值的線性回歸方程建立過程如下：

⑥以上述④中所述一十四份濃度依次為0.01?mg/mL、0.03?mg/mL、0.05?mg/mL、0.07?mg/mL、0.09?mg/mL、0.11?mg/mL、0.13?mg/mL、0.14?mg/mL、0.2?mg/mL、0.26?mg/mL、0.32?mg/mL、0.38?mg/mL、0.44?mg/mL和0.5?mg/mL的光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液為x軸，以上述⑤中所述一十四個平均吸光度值為y軸建立光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液-平均吸光度值的線性回歸方程，通過EXECL軟件的計算所述線性回歸方程由y=4.4483x和y=1.4208x+0.4013表示，其中y=4.4483x是光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液在其濃度為0.01?mg/mL、0.03?mg/mL、0.05?mg/mL、0.07?mg/mL、0.09?mg/mL、0.11?mg/mL、0.13?mg/mL和0.14?mg/mL時的線性回歸方程，線性濃度范圍：（0.01-?0.14?）mg/mL，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999；y=1.4208x+0.4013是光甘草定標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液在其濃度為0.14?mg/mL、0.2?mg/mL、0.26?mg/mL、0.32?mg/mL、0.38?mg/mL、0.44?mg/mL和0.5?mg/mL時的線性回歸方程，線性濃度范圍：（0.14-?0.5）?mg/mL，相關(guān)系數(shù)R2=0.9957；可以看出：x=0.14?mg/mL是y=4.4483x和y=1.4208x+0.4013的分界拐點，在所述分界拐點時兩個線性曲線具有不同斜率。