[發(fā)明專利]一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒及其使用方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110229325.3
• 申請日: 2011-08-11
• 公開（公告）號: CN102321748A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 鄭衛(wèi)國;夏子芳;杜蔚安;張秀芳;楊輝;周翔
• 申請（專利權）人: 無錫中德美聯生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

?本發(fā)明涉及一種22個基因座的熒光標記復合擴增檢驗試劑盒，具體是涉及一種同時分析人基因組DNA?22個基因座的五色熒光標記復合擴增試劑盒，該試劑盒可以應用于個體識別和親子鑒定。

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背景技術

短串聯重復序列基因座（STR）是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現，特別是STR基因座具有片段小容易擴增，適宜于檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠復合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優(yōu)點。尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優(yōu)越性。因此美國FBI選擇了13個STR基因座用于建立DNA數據庫——CODIS（Combined?DNA?Index?System）：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。

正因為STR所具備的優(yōu)點和應用前景，法醫(yī)學界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進行了開發(fā)性的研究。90年代中后期以美國ABI公司為代表的研發(fā)商建立起熒光復合擴增體系。目前最具代表性的是ABI（Applied?Biosystems,?USA）公司的Identifiler^TM和Promega（USA）公司的PowerPlex-16熒光檢測試劑盒。這兩個試劑盒均包括上述13個核心基因座。

長期的DNA檢驗實踐表明，短串聯重復序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在美國FBI推薦的13個核心基因座中，有部分基因座遺傳多態(tài)性不高，或是不同人群間差異較大。由此給DNA檢驗技術的應用及其效率帶來一定的影響。

專利ZL200510096613.6公開了一種同時分析人基因組DNA的多個基因座的熒光標記復合擴增系統(tǒng)，其特征在于：所述的15個基因座為：Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta?E、CSF1PO、vWA、FGA。該專利提供了對15個基因座的分型結果，為4色熒光檢測試劑盒。

我們對中國人群的短串聯重復序列基因座的遺傳多態(tài)性進行了深入的研究，并以此為依據開發(fā)新的短串聯重復序列基因座的復合擴增檢驗試劑盒，以求在5色熒光檢測試劑盒中，提供對包括Amelogenin在內的22個基因座的分型結果，同時提高試劑盒的累計個體識別能力和累積非父排除率。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的之一在于：提供一種通過復合擴增22個基因座來進行個體識別和親子鑒定的熒光標記STR復合擴增檢驗試劑盒。涉及檢測人基因組中具有多態(tài)性的遺傳標記。本發(fā)明特別涉及用聚合酶鏈式反應在一個體系中同時擴增多個短串聯重復基因座。

為了實現本發(fā)明的目的，采用如下技術方案：

一種同時分析人基因組DNA?22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，所述的22個基因座為：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta?E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta?D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性別基因座Amelogenin；其特征在于：該試劑盒包括22個基因座對應的引物如下：

22個基因座對應的引物的濃度為：

所述的每個基因座對應的引物中至少有一個引物的5’端進行熒光染料標記。

所述的熒光染料標記物為6-FAM、HEX、TAMRA或ROX。