[發明專利]一種能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌及其應用

有效

• 申請號: 201110228969.0
• 申請日: 2011-08-05
• 公開（公告）號: CN102911891A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 陳令新;張衛衛;殷堃;牛宗亮;潘婷;趙君才
• 申請（專利權）人: 煙臺海上傳奇生物技術有限公司;中國科學院煙臺海岸帶研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C07B63/00;G01N21/64;C12R1/385
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌，其特征在于：銅綠假單胞菌(Pseudomonas?aeruginosa)PA1，該菌株已在在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)登記保藏；保藏日期為2011年04月28日；編號為CGMCC?No.4799。

2.一種權利要求1所述的能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌的應用，其特征在于：利用銅綠假單胞菌分泌的熒光鐵載體檢測呋喃唑酮。

3.按照權利要求2所述的能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌的應用，其特征在于：所述銅綠假單胞菌分泌的熒光鐵載體的產生及純化過程為：

1)PA1培養：將銅綠假單胞菌培養在無機鹽加丁二酸培養基中，培養溫度為28～30℃，培養轉速180～200rpm/min，培養時間為48-72h；

2)熒光鐵載體的純化：將上述培養物以10,000?13,000rpm的轉速下離心5-10min，取上清，將上清液中加入2倍于上清液體積的結合緩沖液，然后將此混合溶液加入到銅離子螯合色譜柱中進行親和層析，洗脫下組分，即為熒光鐵載體。

4.按照權利要求3所述的能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌的應用，其特征在于：所述無機鹽加丁二酸培養基成分為每升水中加入磷酸氫二鉀6.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸銨1.0g，七水硫酸鎂0.1g和丁二酸4.0g。

5.按照權利要求3所述的能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌的應用，其特征在于：所述結合緩沖液為0.02M磷酸鈉和1M氯化鈉，pH?7.2。所述的洗脫緩沖液的成分為0.02M磷酸鈉，0.5M氯化鈉，0.05M?EDTA，pH7.2。

6.按照權利要求3所述的能夠分泌熒光鐵載體的銅綠假單胞菌的應用，其特征在于：熒光鐵載體的純化過程為：將混入了結合緩沖液的上清液加入到銅離子螯合色譜柱中，然后加入5-10倍體積的結合緩沖液進行洗滌，使熒光鐵載體結合到銅離子螯合的色譜柱上。最后加入2-5倍體積的洗脫緩沖液進行洗脫，即可得到較純的熒光鐵載體。