[發明專利]一種硫糖肽的純化工藝

有效

• 申請號: 201110227778.2
• 申請日: 2011-08-10
• 公開（公告）號: CN102321151A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 李剛;李全義;王新志
• 申請（專利權）人: 山東眾山生物科技有限公司
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/18
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

技術領域????

本發明涉及化學藥物硫糖肽技術領域，特別涉及一種硫糖肽的純化工藝。

背景技術???

硫糖肽是由豬十二指腸的提取物糖肽，經過硫酸化得到的一種硫酸多酯。硫糖肽是胃保護和抗潰瘍藥物，適用于治療十二指腸潰瘍和胃炎。目前在意大利上市，國內尚未見報道。藥物的藥效與硫含量的高低息息相關。現有硫糖肽原料藥一般存在純度不高，一般低于95%，硫含量偏低，一般低于14.8%，會嚴重影響藥效的發揮。

發明內容???

為了解決以上問題，本發明提供了一種純化硫糖肽、提高硫含量的硫糖肽的純化工藝。

????本發明是通過以下方式實現的：

一種硫糖肽的純化工藝，包括以下步驟：

（1）樣品準備：將硫糖肽粗品溶解于1wt%的氯化鈉溶液中，硫糖肽濃度為5wt%，用醋酸調節pH值為6.0；

（2）緩沖溶液的配制：分別配制濃度為1wt%、4wt%和10wt%的氯化鈉緩沖溶液，分別加入醋酸0.05M，調節pH為6.0；

（3）離子層析柱預處理：離子交換柱中填充瓊脂糖凝膠6B，填充體積與被分離樣品的體積比為1：2，用10wt%的氯化鈉緩沖溶液沖洗離子交換柱，緩沖液用量為3倍樹脂體積，然后用1wt%的氯化鈉緩沖溶液平衡離子交換柱，緩沖液用量為3倍樹脂體積；

（4）樣品上柱：流速控制2倍樹脂體積/h，上完樣品后，用1wt%的氯化鈉緩沖溶液沖洗，緩沖液用量為1倍樹脂體積；

（5）洗滌：用4wt%的氯化鈉緩沖溶液洗滌離子交換柱1小時，流速為2倍樹脂體積/h；

（6）洗脫：用10wt%氯化鈉緩沖溶液洗脫離子交換柱1小時，流速為2倍樹脂體積/h，得洗脫液；

（7）超濾脫鹽：將洗脫液用孔徑0.45μm濾膜過濾，然后用3萬分子量的超濾膜進行超濾脫鹽至鹽度2%，再濃縮至洗脫液體積的3/4；

（8）沉淀、干燥：用95%以上的乙醇按體積比1:1將濃縮液在攪拌條件下沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。

瓊脂糖凝膠6B載量為110mg/mL，粒徑45-165μm。

本發明的有益效果：經過純化的硫糖肽，純度能達到99.5%以上，硫含量15.3%以上，彌補了硫糖肽純度不高，硫含量偏低的缺陷，可以作為標準品使用，節約了購買標準品的成本。

附圖說明???

附圖1為使用本發明純化工藝純化得到的硫糖肽使用液相色譜法檢測得到的譜圖，

附圖2為購自韓國的硫糖肽標準品使用液相色譜法檢測得到的譜圖。

具體實施方式

實施例1

硫糖肽的純化工藝，包括以下步驟：

（1）樣品準備：取硫糖肽粗品10g，純度為85%，含硫量為14.5%，溶解于1wt%的氯化鈉溶液中，硫糖肽濃度為5wt%，用醋酸調節pH值為6.0，共200mL；

（2）緩沖溶液的配制：分別配制濃度為1wt%、4wt%和10wt%的氯化鈉緩沖溶液，分別加入醋酸0.05M，調節pH為6.0；

（3）離子層析柱預處理：離子交換柱中填充載量為110mg/ml的DEAE-sepharose?6B，?填充100ml，用10wt%的氯化鈉緩沖液沖洗離子交換柱，緩沖液用量為300mL，然后用1wt%的氯化鈉緩沖液平衡離子交換柱，緩沖液用量為300mL；

（4）樣品上柱：流速控制200mL/h，上完樣品后，用1wt%的氯化鈉緩沖液沖洗，緩沖液用量為100mL；

（5）洗滌：用4wt%的氯化鈉緩沖液洗滌離子交換柱1小時，流速為200mL/h；

（6）洗脫：用10wt%氯化鈉緩沖液洗脫離子交換柱1小時，流速為200mL/h，得洗脫液200mL；

（7）超濾脫鹽：將洗脫液用孔徑0.45μm濾膜過濾，然后用3萬分子量的超濾膜進行超濾脫鹽至鹽度2%，再濃縮至150ml；

（8）沉淀、干燥：用95%的乙醇按體積比1:1將濃縮液在攪拌條件下沉淀，所得沉淀脫水干燥，得到純化的硫糖肽。

以韓國的硫糖肽標準品作為標準，采用外標法測得本發明純化工藝得到的硫糖肽含量為102%，硫含量為15.5%，譜圖如附圖1和附圖2所示。說明本發明的純化工藝得到的硫糖肽純度已經超過硫糖肽標準品，本身已經可以作為標準品使用。