[發明專利]一種能識別草魚IgM的單鏈抗體C1B3

有效

• 申請號: 201110223496.5
• 申請日: 2011-08-05
• 公開（公告）號: CN102268091A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 戴和平;羅紹祥;陳叢林;張曉華;廖蘭杰;汪亞平
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N15/13;G01N33/569;C12P21/08;C12R1/92
• 代理公司: 武漢荊楚聯合知識產權代理有限公司 42215
• 代理人: 王健

技術領域

本發明涉及水產養殖品種對病原體的免疫響應，具體涉及一種能識別草魚血清中抗體IgM的單鏈抗體。

背景技術

草魚是我國淡水養殖業重要的養殖品種之一，檢測病原體的感染和通過疫苗免疫途徑防治病原體的感染，是草魚高產的重要保障。IgM存在于大多數真骨魚類血清中，也存在于草魚中，是個體發育過程中最早出現的抗體，也是初次體液免疫應答中最早出現的抗體。病原體的感染與IgM表達水平具有明顯的響應關系，因此檢測草魚血清中IgM的水平，可以提示草魚新近是否發生感染。抗體是研究蛋白表達水平與誘導信號相互關系的有力工具，可應用于研究草魚對病原體的免疫應答、疫苗效價測定。

噬菌體抗體展示技術是近年來出現的一種基因工程抗體表達和篩選的新技術，它是將抗體片段基因通過與噬菌體的外殼蛋白基因融合，而將抗體表達于噬菌體顆粒的表面。由于表達的抗體具有生物活性并可與其相應的抗原相識別，因此可根據抗原抗體結合的特異性進行篩選、富集克隆帶有目的抗體的噬菌體。該技術將噬菌體表面表達的抗體的基因型與表現型聯系在一起，把抗原抗體結合的特異性同噬菌體的可擴增性聯系起來，成為一種高效的篩選體系。由于該技術的宿主細胞是大腸桿菌，因此大大優于依賴于動物的多克隆抗體和依賴于雜交瘤細胞的單克隆抗體的制備過程，使得特異性抗體的篩選和生產更加簡便高效，并能大量生產。

發明內容

本發明的目的是提供一種識別草魚IgM的單鏈抗體C1B3，該單鏈抗體C1B3通過噬菌體展示技術制備。本發明的優點在于，提供一種檢測草魚免疫反應的工具，減少了檢測的成本，可以針對病原體的感染，檢測草魚血清中的IgM的水平。

為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

編碼單鏈抗體C1B3基因的DNA序列如下：

GCGGCCCAGCCGGCCATGGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATACGCCATCTCTAAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGAGAGACGGGGTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACCGTGTCGACAGGTGGAGGCGGCTCTGGTGGCGGTGGCAGTGGCGGCGGAGGTTCTGACGTCGTGATGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGACTCCAGGAGAAACAGTCAGTCTTTCCTGTAGGGCCAGCCAGAGTATTTACAAGAACCTACACTGGTATCAACAGAAATCACATCGGTCTCCAAGGCTTCTCATCAAGTATGCTTCTGATTCCATCTCTGGGATCCCCTCCAGGTTCACTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTACACTCTCAGTATCAACAGTGTGAAGCCCGAAGATGAGGGAATATATTACTGTCTTCAAGGTTACAGCACACCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGTTGGAAATCAAGCGCGCGGCCGCAGGTGCGCCGGTGCCGTATCCGGATCCGCTGGAACCGCGTGCCGCATAGACTGTTGAAAGTTGTTTAGCAAAACCTCATACAGAAAATTCATTTACTAACGTCTGGAAAGACGACAAAACTTTAG

單鏈抗體C1B3的預測氨基酸序列為：

MAEVQLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARETGYYFDYWGQGTTLTVSTGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSPATLSVTPGETVSLSCRASQSIYKNLHWYQQKSHRSPRLLIKYASDSISGIPSRFTGSGSGTDYTLSINSVKPEDEGIYYCLQGYSTPYTFGGGTKLEIKRAAAGAPVPYPDPLEPRAA.

一種識別草魚IgM的單鏈抗體C1B3的制備方法：