[發(fā)明專利]變性梯度凝膠電泳技術(shù)檢測黃酒麥曲中細菌群落結(jié)構(gòu)的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110222810.8 | 申請日： | 2011-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN102277432A | 公開（公告）日： | 2011-12-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陸健;張中華;管政兵;陳亮亮 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N27/447 |
| 代理公司： | 北京匯信合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335 | 代理人： | 王秀麗 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 變性 梯度 凝膠電泳 技術(shù) 檢測 黃酒 麥曲中 細菌 群落 結(jié)構(gòu) 方法 | ||
1.變性梯度凝膠電泳技術(shù)檢測黃酒麥曲中細菌群落結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于提取麥曲樣品基因組DNA后，通過特定引物PCR擴增細菌16S?rDNA?V3區(qū)、DGGE電泳進行條帶分離，條帶回收后進行二次PCR及T-克隆，挑選陽性克隆子DGGE條帶比對，比對正確后測序并到GenBank獲取微生物的相關(guān)信息。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述樣品為任一種待檢測的黃酒麥曲樣品，樣品采用縮分法取樣，最終樣品的重量為1g。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述特定引物為F1：
?5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3’，R1：5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’。
4.權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述PCR擴增程序為：94℃預(yù)變性4min，94℃變性45S，55℃退火45S，72℃延伸45S，35個循環(huán)，最后72℃延伸10min。
5.權(quán)利要求1-2所述的方法，其特征在于所述變性梯度凝膠電泳的相關(guān)參數(shù)是：電壓150V，60℃下電泳4h，丙烯酰胺凝膠濃度為8％，變性梯度是50％-65％，100％的變性劑由7mol/L尿素和質(zhì)量分數(shù)為40％的去離子甲酰胺組成。
6.權(quán)利要求1-2所述的方法，其特征在于所述對DGGE膠上的條帶回收過程為：將10000×SYBR-Green稀釋成1×SYBR-Green進行染色，染色過程分3次，每次染色15min；用無菌小刀將優(yōu)勢條帶切下后放入滅過菌的離心管中，加入200μL的滅菌雙蒸水4℃冰箱過夜。
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