[發明專利]對磷酸氫二銨耐受的枯草芽孢桿菌的篩選方法

有效

• 申請號: 201110222039.4
• 申請日: 2011-08-04
• 公開（公告）號: CN102344893A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 解麗娟;尹川;李寶成;馮作山
• 申請（專利權）人: 雙贏集團有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛;徐麗維

1.一種對磷酸氫二銨耐受的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)的篩選方法，其特征在于包括如下過程：

(1)篩選：將枯草芽孢桿菌CGMCC?1.0769，以營養瓊脂為培養基，先進行試管斜面培養，然后再進行培養皿斜面劃線培養后篩選出典型的枯草芽孢桿菌的單菌落；將典型的枯草芽孢桿菌轉入營養瓊脂試管斜面，進行培養；

(2)馴化：在營養瓊脂培養基里增加磷酸氫二銨，制成磷酸氫二銨濃度不同的培養皿，把步驟(1)中最后培養得到的枯草芽孢桿菌先在磷酸氨二銨濃度較低的培養皿中劃線培養；將培養的單菌落轉移到試管斜面培養后作為菌種，再在下一個磷酸氫二銨濃度較高的培養皿中劃線培養，以此類推，逐步提高磷酸氫二銨濃度，篩選出能夠耐受較高濃度磷酸氫二銨的枯草芽孢桿菌。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中磷酸氫二銨質量濃度分別為10％、15％、20％和25％。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述營養瓊脂組成為：每1000ml水用蛋白胨10克、牛肉粉3.0克和氯化鈉5.0克，pH值為7.3±0.1。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：各步驟中所述培養條件為在恒溫培養箱中34℃±0.5℃培養3-5天。