[發明專利]過表達RimL的大腸桿菌及其在制備N-乙酰化胸腺素α中的應用

有效

• 申請號: 201110221416.2
• 申請日: 2011-08-03
• 公開（公告）號: CN102277327A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 吳軍;劉波;鞏新;唱韶紅;馬清鈞
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種重組菌，為如下1)或2)：

1)將RimL的編碼基因和胸腺素α的編碼基因導入宿主菌中得到的重組菌；所述宿主菌為基因組中含有RimL編碼基因的宿主菌；

2)將胸腺素α的編碼基因導入如下權利要求6-8中任一所述的重組菌中得到的重組菌；

所述RimL為如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)與a)或b)限定的DNA序列至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白；

所述胸腺素α為一種多肽或蛋白，其N末端的28個氨基酸殘基與序列表中序列3的N末端的28個氨基酸相同或其N末端的28個氨基酸殘基與序列表中序列3的N末端的28個氨基酸至少具有90％同源性。

2.根據權利要求1所述的重組菌，其特征在于：

1)所示的重組菌中，所述將RimL的編碼基因和所述胸腺素α的編碼基因導入宿主菌的方法包括如下步驟：

a)將所述RimL的編碼基因通過重組載體2導入所述宿主菌，得到重組菌A；

b)將所述胸腺素α的編碼基因通過重組載體1導入步驟a)得到的所述重組菌A，得到重組菌；

所述重組載體1為所述胸腺素α編碼基因插入表達載體1中，得到表達胸腺素α的重組載體1；所述表達載體1優選為pBV220；

所述重組載體2為將所述RimL的編碼基因插入表達載體2中，得到表達RimL的重組載體2，所述表達載體2優選為pOKBV。

3.根據權利要求1或2所述的重組菌，其特征在于：

1)所示的重組菌中，所述宿主菌為大腸桿菌；

所述RimL編碼基因是如下1)或2)所示的DNA分子：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)與1)限定的DNA序列至少具有90％同源性且編碼具有相同功能的蛋白的DNA分子；

所述胸腺素α編碼基因為一種多核苷酸，其核苷酸序列與序列表中的序列4的5’末端起84位核苷酸相同或者與序列表中的序列4的5’末端起84位核苷酸同源性至少具有90％的DNA分子。

4.一種重組菌A，為將所述RimL的編碼基因通過重組載體導入宿主菌中，得到的重組菌A；

所述重組載體為將所述RimL的編碼基因插入表達載體中，得到表達RimL的重組載體，所述表達載體是通過誘導型啟動子控制RimL的編碼基因表達的。

5.根據權利要求4所述的重組載體，其特征在于：所述誘導型啟動子為乳糖啟動子、阿拉伯糖啟動子、堿性磷酸酯酶啟動子、色氨酸啟動子、噬菌體T7、P_L、P_R啟動子或含有這些啟動子部分元件的雜合啟動子Tac、P_LP_R，所述表達載體優選為pOKBV。

6.一種重組菌，為將外源誘導型啟動子插入宿主菌的乙酰基轉移酶編碼基因的上游，用于啟動所述乙酰基轉移酶編碼基因的表達，得到的重組菌。

7.根據權利要求6所述的重組菌，其特征在于：所述誘導型啟動子為乳糖啟動子、阿拉伯糖啟動子、堿性磷酸酯酶啟動子、色氨酸啟動子、噬菌體T7、P_L、P_R啟動子或含有這些啟動子部分元件的雜合啟動子Tac、P_LP_R。

8.根據權利要求6或7所述的重組菌，其特征在于：

所述宿主菌為大腸桿菌；

所述誘導型啟動子為噬菌體T7啟動子，其核苷酸序列為序列表中序列5的自5’末端第1119-1135位核苷酸；

所述乙酰基轉移酶為RimL，

所述RimL為如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)與a)或b)限定的氨基酸至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白。

9.權利要求1-8中任一所述的重組菌在制備N-乙酰化胸腺素α中的應用。

10.一種制備N-乙酰化胸腺素的方法，包括如下步驟：

發酵權利要求1-3中任一所述的重組菌，收集發酵產物，即得到N-乙酰化胸腺素α；

所述發酵的溫度為42℃，所述發酵時間為12h。