技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種過表達RimL的大腸桿菌及其在制備N-乙酰化胸腺素α中的應用。

背景技術

蛋白和多肽的N-末端乙?；揎検钦婧思毎衅毡榇嬖诘囊环N修飾，50％以上的真核細胞胞漿蛋白都有這種修飾。初步的功能研究表明N-末端乙酰化可通過改變N-端的電荷性，封閉N端等方式，對許多蛋白和多肽的空間結構、配體識別、抗降解等特性產生重要影響。如小分子GTPaes-Arl3P蛋白的N-末端乙酰化修飾促進了其與膜受體Sys1p/hSys1的識別，并使其定位到膜上。胎兒血紅蛋白的N-末端乙酰化可以使其四聚體的解聚能力提高30倍。胸腺素α1(thymosinα1，Tα1)的N-末端乙酰化對其在血漿中的穩定性具有重要作用。除了Tα1外，還有如黑色素細胞刺激素(Melanocyte-Stimulating?Hormones，α-MSH)、胸腺素β4(Thymosin?β4，Tβ4)等一批在臨床上具有重要應用的多肽也需要N-末端乙酰化修飾。

與真核生物中的普遍存在現象明顯不同的是，原核生物的N-末端乙?；揎椃浅：币?。在大腸桿菌內源蛋白中已知發生N-末端乙酰化修飾的只有核糖體亞基L7、S5、S18、延長因子EF-Tu和伴侶蛋白SecB等為數不多的幾種蛋白。大腸桿菌中已經發現的參與蛋白和多肽的N-末端乙?；揎椀囊阴；D移酶只有負責核糖體亞基S5乙酰化修飾的RimI，核糖體亞基S18乙酰化修飾的RimJ，和核糖體亞基L7乙?；揎椀腞imL。這些乙?；D移酶有很強的底物專一性。除上述每個酶對應的特異性底物外，未知其能修飾大腸桿菌的其它蛋白或多肽。

胸腺素α是一族具有相同或相似的N-端序列的免疫調節多肽，它們包括胸腺素α原、胸腺素α1、胸腺素α11及其各種融合蛋白等。胸腺素α1和胸腺素α11是胸腺素α原在體內降解的產物，它們分別包括了胸腺素α原的N-端28和35個氨基酸。不同物種的胸腺素α具有很高的保守性。胸腺素α的氨基酸序列上某些位點存在多態性，如其N-端第13位氨基酸殘基，有的是蘇氨酸，有的是異亮氨酸，它們具有相同或相似的功能。

胸腺肽是一類動物胸腺中提取的包含各種胸腺素α及其它胸腺來源肽類的免疫制劑，已廣泛用于病毒性肝炎、腫瘤等的治療。但動物提取的胸腺肽存在成分復雜，純度低，其中混有動物來源的污染物，易產生過敏反應等問題?；瘜W合成的N-乙酰化胸腺素α1，是一種采用多肽化學合成方法制備的N-乙?；叵偎卅?，此種方法獲得的Tα1純度高、活性高、沒有明顯的副反應，如SciClone公司的“日達仙”，已被包括我國在內的多個國家批準用于病毒性肝炎的治療獲作為免疫調節藥物；但化學合成N-乙?；叵偎卅?這樣一個28個氨基酸的多肽，合成和純化工藝復雜，得率較低，因此制品價格高，限制了該藥的廣泛應用。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種重組菌。

本發明提供的重組菌，為如下1)或2)：

1)將RimL的編碼基因和胸腺素α的編碼基因導入宿主菌中得到的重組菌；所述宿主菌為基因組中含有RimL編碼基因的宿主菌；

2)將胸腺素α的編碼基因導入如下所述的重組菌中得到的重組菌；

所述RimL為如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)與a)或b)限定的DNA序列至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白；

所述胸腺素α為一種多肽或蛋白，其N末端的28個氨基酸殘基與序列表中序列3的N末端的28個氨基酸相同或其N末端的28個氨基酸殘基與序列表中序列3的N末端的28個氨基酸至少具有90％同源性。

所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

1)所示的重組菌中，所述將RimL的編碼基因和胸腺素α的編碼基因導入宿主菌的方法包括如下步驟：

a)將所述RimL的編碼基因通過重組載體2導入所述宿主菌，得到重組菌A；

b)將所述胸腺素α的編碼基因通過重組載體1導入步驟a)得到的所述重組菌A，得到重組菌；