[發明專利]一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法

有效

• 申請號: 201110220687.6
• 申請日: 2011-08-03
• 公開（公告）號: CN102359995A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 孟濤;馮文宇;婁玉濤;尤楠;金玉坤;尹宏;蘇貴弟;孟喆;周巖;唐奎山;刁恩德;劉愛泉
• 申請（專利權）人: 東北制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

技術領域

本發明涉及藥物分析領域中的一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法。

背景技術

左卡尼汀(carnitine)，又名左旋肉堿，于1905年由兩位俄國科學家在肌肉提 取物中首次被發現，其分子結構式為3-羥基-4-氮-三甲氨基丁酸。左卡尼汀是一 種廣泛存在于機體組織內的特殊氨基酸，為脂肪酸代謝的必需輔助因子，能促 進脂肪酸經B-氧化進入三羧酸循環，產生能量，與機體的器官、組織代謝密切 相關。左卡尼汀的缺乏會導致能量供應障礙及脂肪酸代謝的各種中間產物累積 酸中毒，出現心肌病變、心律失常、機體疲勞等癥狀。左卡尼汀有兩種光學異 構體，即左旋體和右旋體，但僅左旋體具有生物活性，右旋體不具有任何活性。 為保證藥品的質量及其安全性，需建立檢測方法對右旋體的含量進行控制。目 前，關于左卡尼汀右旋異構體的檢測方法，未見相關報道。因此，研制開發一 種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法一直是亟待解決的新課題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法，該方法采 用衍生化試劑右旋的芴甲氧羰酰氯，與左卡尼汀中的右旋異構體形成熒光化合 物，然后采用HPLC(熒光檢測器、梯度淋洗法)進行檢測，通過該方法檢測左卡 尼汀中右旋異構體，重現性、靈敏度、準確度均能符合要求。

本發明的目的是這樣實現的：一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法，該 檢測方法包括如下步驟：

(1)色譜條件：

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18柱，粒徑5μm；

檢測波長：激發光波長λex＝260nm，熒光波長λem＝315nm；

流動相：四正丁基氫氧化銨-甲醇和乙腈-水；

(2)四正丁基氫氧化銨溶劑的制備：

吸取24.4ml的55％的四正丁基氫氧化銨試劑，用水稀釋至1000ml，搖勻， 用磷酸調節pH至7.0；

(3)芴甲氧羰酰氯試劑的制備：

吸取1.0ml的0.5％芴甲氧羰酰氯試劑，加3ml的丙酮，混勻；

(4)系統適用性溶液的制備：

稱取混旋左卡尼汀對照品10mg，用四正丁基氫氧化銨溶劑溶解并稀釋至 50ml，搖勻；

(5)供試品溶液的制備：

稱取供試品約10mg，用四正丁基氫氧化銨溶劑溶解并稀釋至50ml，搖勻；

(6)衍生反應：

分別吸取供試品溶液、系統適用性溶液各0.1ml于容器中，再分別加0.4ml 芴甲氧羰酰氯試劑，置于80℃熱反應器中，放置20分鐘，取出冷卻至室溫，分 別加入8ml的四正丁基氫氧化銨-甲醇流動相；

(7)測定方法：

取系統適用性溶液的衍生反應液5μl注入液相色譜儀，重復6次，記錄圖 譜，左旋左卡尼汀保留時間為17.8分鐘，右旋左卡尼汀保留時間為14.5分鐘， 左旋左卡尼汀、右旋左卡尼汀的相對標準偏差均應≤2.0％，取供試液的衍生反 應液5μl注入液相色譜儀，記錄圖譜，分別計算供試液中左旋左卡尼汀的峰面 積和右旋左卡尼汀的峰面積；

一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法，所述四正丁基氫氧化銨-甲醇流 動相中的四正丁基氫氧化銨溶液的配制方法為，精密吸取2.4ml的55％的四正丁 基氫氧化銨試劑，置于1000ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻；所述流動相 四正丁基氫氧化銨-甲醇配比為60∶40，pH值為3.0；所述流動相乙腈-水的配比 為65∶35，pH值為3.0；所述檢測方法采用流動相四正丁基氫氧化銨-甲醇和乙 腈-水濃度、流速梯度淋洗法；所述濃度、流速梯度淋洗法為如下步驟，洗脫開 始后0-30分鐘，四正丁基氫氧化銨-甲醇作為流動相，流速為0.75ml/分；洗脫 開始后31-49分鐘，乙腈-水作為流動相，流速為1.5ml/分；洗脫開始后50-55 分鐘，四正丁基氫氧化銨-甲醇作為流動相，流速為0.75ml/分。

本發明的要點在于它的檢測方法，該方法采用衍生化試劑右旋的芴甲氧羰 酰氯，與左卡尼汀中的右旋異構體形成熒光化合物，然后采用HPLC(熒光檢測器、 梯度淋洗法)進行檢測。

一種左卡尼汀中右旋異構體的檢測方法與現有技術相比，通過該方法檢測 左卡尼汀中右旋異構體，重現性、靈敏度、準確度均能符合要求等優點，將廣 泛的應用于藥物分析領域中。

具體實施方式