[發明專利]檢測腸道病毒中和抗體的方法及其專用重組病毒

無效

• 申請號: 201110220476.2
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102911948A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 李文輝;宋子林;陳盼;祁永和;梁爭論;吳星;沈心亮
• 申請（專利權）人: 北京生命科學研究所
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C12N15/53;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N7/01;C07K14/085;C12Q1/70;C12Q1/66;C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一個DNA分子，是將腸道病毒屬病毒的基因組RNA對應的cDNA中的所有結構蛋白的編碼基因替換為報告基因得到的重組DNA。

2.根據權利要求1所述的DNA分子，其特征在于：

所述DNA分子是將腸道病毒71型的基因組RNA對應的cDNA中的所有結構蛋白的編碼基因替換為報告基因得到的重組DNA；所述所有結構蛋白的氨基酸序列為序列表中序列1所示。

3.根據權利要求1或2所述的DNA分子，其特征在于：

所述報告基因為熒光素酶報告基因；

所有結構蛋白的編碼基因為如下1)-3)中任一所述的基因：

1)其核苷酸序列為序列表中序列2第733位到3315位所示；

2)在嚴格條件下與1)所示的基因雜交且編碼所述結構蛋白的基因；

3)與1)或2)的基因具有90％以上的同源性且編碼所述結構蛋白的基因；

所述熒光素酶基因的核苷酸序列如序列表中序列3第771位到2420位所示。

4.根據權利要求1-3中任一所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子為序列表中序列3第1位到6544位所示的DNA分子。

5.含有權利要求1-4中任一所述DNA分子的表達盒、重組載體、轉基因細胞系、重組菌或重組病毒；所述重組載體具體為重組表達載體。

6.一種用于檢測腸道病毒中和抗體的組合物，為組合物A或組合物B；

所述組合物A為如下1)或2)或3)所示：

1)由權利要求1-4中任一所述的DNA分子和權利要求1-3中任一所述的所有結構蛋白的編碼基因組成的組合物；

2)由權利要求1-4中任一所述的DNA分子和柯薩奇病毒A16的所有結構蛋白I的編碼基因組成的組合物；所述所有結構蛋白I的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列5第733位到3315位所示；

3)由權利要求1-4中任一所述的DNA分子和融合基因I組成的組合物；所述融合基因I為如下a)或b)所示：

a)所述融合基因I是由報告基因、腸道病毒的2A^pro蛋白酶的識別位點和權利要求1-3中任一所述的所有結構蛋白的編碼基因依次連接而成；

b)所述融合基因I是由報告基因、腸道病毒的2A^pro蛋白酶的識別位點和柯薩奇病毒A16的所有結構蛋白I的編碼基因依次連接而成；所述所有結構蛋白I的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列5第733位到3315位所示；

所述組合物B為由權利要求5所述的重組載體和重組載體I組成的組合物；所述重組載體I為如下c)或d)或e)所示：

c)含有權利要求1-3中任一所述的所有結構蛋白的編碼基因的重組載體；

d)含有柯薩奇病毒A16的所有結構蛋白I的編碼基因的重組載體；所述所有結構蛋白I的編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列5第733位到3315位所示；

e)含有所述融合基因I的重組載體。

7.一種重組病毒，是將權利要求6所述的用于檢測腸道病毒中和抗體的組合物在離體的哺乳動物細胞中包裝得到的重組病毒。

8.權利要求1-4中任一所述DNA分子、權利要求5所述的表達盒、權利要求5所述的重組載體、權利要求5所述的轉基因細胞系、權利要求5所述的重組菌、權利要求5所述的重組病毒、權利要求6所述的組合物或權利要求7所述的重組病毒在檢測腸道病毒中和抗體中的應用。

9.一種檢測腸道病毒中和抗體的方法，包括以下步驟：

將權利要求7所述的重組病毒與系列稀釋的待測抗體混合，得到混合物；用所述混合物感染對腸道病毒敏感的細胞，根據所述對腸道病毒敏感的細胞中報告基因的表達物所產生的信號定性檢測待測抗體的有效性或定量檢測待測抗體的效價。

10.一種檢測腸道病毒中和抗體的試劑盒，含有下述至少一種物質：1)權利要求1-4中任一所述DNA分子、2)權利要求5所述的表達盒、3)權利要求5所述的重組載體、4)權利要求5所述的轉基因細胞系、5)權利要求5所述的重組菌、6)權利要求5所述的重組病毒、7)權利要求6所述的組合物、8)權利要求7所述的重組病毒。