[發(fā)明專利]一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110219417.3
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102305857A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡德明;周小棉;吳本清;黃楚銘;劉清波;何林;陽輝
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明申請涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測人體血清中幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑及其檢測方法。

背景技術(shù)

幽門螺桿菌(Helicobacter?pylori，簡稱HP)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌，呈革蘭染色陰性，在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。

幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性胃潰瘍以及胃黏膜相關(guān)淋巴組織(MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機構(gòu)(WHO/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原。慢性胃炎患者的胃粘膜活檢標本中幽門螺桿菌檢出率可達80％～90％，而消化性胃潰瘍患者更高，可達95％以上，甚至接近100％。胃癌由于局部上皮細胞已發(fā)生異化，因此其檢出率高低報道不一。幽門螺桿菌的感染已是個世界性問題，對其進行準確診斷有利于控制HP傳播與流行及根除HP感染治療的監(jiān)測。

目前，國內(nèi)外已建立的HP檢測方法從檢測手段上分為侵入性和非侵入性兩大類。

一、侵入性檢測方法

這類方法的特點是使用內(nèi)窺鏡取得胃活檢組織后進行檢測，試驗方法主要有快速尿酶試驗法、病理學檢測法及細菌培養(yǎng)法。

1、快速尿酶檢測法：依據(jù)HP具有豐富的尿素酶可分解尿素產(chǎn)生氨氣，由pH指示劑顯色。該法簡便、迅速、靈敏，但也有可能因含尿素酶的其他細菌存在而產(chǎn)生假陽性。此外，近期使用過降低胃部細菌量或直接抑制尿素酶活性的藥物的樣品可產(chǎn)生假陰性。

2、病理學檢測法：通過對胃粘膜組織進行切片染色檢查，可直接顯示HP菌體而證實，其中銀染法檢測率高，但不同病理學家觀察的差異性對于胃萎縮樣品的診斷具有一定的困難性。

3、細菌培養(yǎng)法：取胃粘膜活組織作HP培養(yǎng)，因培養(yǎng)細菌較少、操作過程較復雜、時間周期較長、費用昂貴而不適宜普遍應用。

二、非侵入性檢測方法

此類方法特點是不需要使用內(nèi)窺鏡采取胃活檢組織，從而避免病人因反復做胃窺鏡而帶來的侵害痛苦或發(fā)生其它類型的感染。試驗方法主要有尿素呼吸試驗、PCR檢測法和免疫血清學法。

1、尿素呼吸試驗：由于HP富含尿素酶，用¹³C或¹⁴C標記的尿素由受試者服用后，根據(jù)氣體核素質(zhì)譜儀檢測到分解產(chǎn)生的帶同位素標記的二氧化碳標本，來判斷HP感染程度。該法靈敏度高，可定量，但有一定的放射性危險，并且受設(shè)備限制難于普遍推廣。

2、PCR檢測法：主要檢測胃液、粘膜中HP尿素酶(UReA)基因和毒素相關(guān)蛋白A(CagA)基因，但操作復雜，易污染，對檢驗人員的專業(yè)知識及操作技術(shù)的要求較高，且大大增加患者的經(jīng)濟開支，因此在臨床上的應用也較為有限。

3、免疫血清學法：目前已有方法包括酶聯(lián)免疫法、免疫印跡法和膠體金法，為HP的流行病學調(diào)查提供了有利便捷手段，但檢測速度慢，除酶聯(lián)免疫法可使用全自動酶免分析儀(且需2～3小時、步驟多)外，其余都需手工操作，患者獲得檢測結(jié)果為定性分析，不適于治療監(jiān)控及療效評估。

目前，雖然檢測幽門螺旋桿菌感染的方法繁多，但還沒有一種合適的生化分析儀，能夠簡便、快速、大批量且定量的進行檢測。如能建立該種方法，則能使檢測過程大為簡便化，操作人員只需設(shè)置好上機參數(shù)，將試劑和樣本置于相應位置后，生化分析儀即可全自動完成檢測，并能夠迅速得到結(jié)果，易于在各級醫(yī)療機構(gòu)推廣應用，對于幽門螺旋桿菌的防治具有重大的臨床意義和普及價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明申請的目的在于克服現(xiàn)有方法及技術(shù)的缺陷，提供一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑盒及其制備方法以及使用該試劑進行臨床樣本檢測的方法。該試劑適用于各類型生化分析儀，具有樣本無需稀釋、操作簡單、快速、定量準確、重復性好、穩(wěn)定性好、敏感度高、特異性強的特點。

為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用如下的技術(shù)方案：

一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑，包括pH值為8.0±0.3的緩沖液、幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑、校準品、低值質(zhì)控物和高值質(zhì)控物。

其中，pH值為8.0±0.3的緩沖液包括Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HEPES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的一種或多種。

作為優(yōu)選，所述的pH值為8.0±0.3的緩沖液為Tri?s/HCl緩沖液，并含有NaCl、PEG?6000和Tween?80，無機鹽NaCl可以調(diào)節(jié)離子強度，PEG?6000可以加快抗原抗體的免疫反應速度，縮短檢測時間。