[發明專利]一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110219417.3
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102305857A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 胡德明;周小棉;吳本清;黃楚銘;劉清波;何林;陽輝
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

1.一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑，其特征在于：所述的試劑包括pH值為8.0±0.3的緩沖液、幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑、校準品、低值質控物和高值質控物，其中，

1)pH值為8.0±0.3的緩沖液包括Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HEPES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液、HEPPS緩沖液中的一種或多種；

2)幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑所含抗原包括幽門螺桿菌全菌體蛋白抗原、幽門螺桿菌尿素酶抗原、幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A抗原或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A抗原；

3)校準品、低值質控物和高值質控物是用來與樣本比較，進行結果計算和質量控制的幽門螺桿菌抗體溶液，包括PBS緩沖液、FBS、適量穩定劑、適量防腐劑和一定濃度的幽門螺桿菌特異性抗體。

2.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于：所述的pH值為8.0±0.3的緩沖液為Tris/HCl緩沖液，并含有NaCl、PEG?6000和Tween?80。

3.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于：所述的幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑的制備包括如下步驟：

1)步驟1：幽門螺桿菌特異性抗原的制備；

2)步驟2：在膠乳粒徑為50-150nm的膠乳溶液中加入步驟1所得抗原，室溫攪拌8-15小時，以10,000rpm的速度離心10-20分鐘，去除上清液；

3)步驟3：在步驟2所得沉淀中加入封閉液，混合均勻，室溫攪拌0.5小時，以10,000rpm的速度離心10-20分鐘，去除上清液；

4)步驟4：在步驟3所得沉淀中加入含穩定劑和防腐劑的緩沖液洗滌分散。

4.根據權利要求3所述的試劑，其特征在于：所述的幽門螺桿菌特異性抗原的制備包括如下步驟：

1)步驟1：細菌培養，包括固態培養、液態小量培養和液態大量培養；

2)步驟2：細菌鑒定、破碎、離心、提取上清、純化及蛋白濃度測定。

5.根據權利要求3所述的試劑，其特征在于：步驟1所獲得的抗原用pH＝7.0的0.05M甘氨酸緩沖液調節至中性，加入至步驟2所述膠乳溶液中后，在10分鐘之內與膠乳顆粒溶液化學交聯致敏，形成共價抗原-膠乳復合物。

6.根據權利要求3所述的試劑，其特征在于：步驟2所述膠乳溶液為用PBS將聚乙烯基芐基氯膠乳顆粒混勻、離心、清洗后獲得。

7.根據權利要求3所述的試劑，其特征在于：步驟3中將形成的共價抗原-膠乳復合物溶液，用0.05％BSA的磷酸鹽緩沖液封閉膠乳顆粒未結合抗原的表面活性基團甲基氯。

8.根據權利要求3所述的試劑，其特征在于：步驟4所述穩定劑選自蛋白質、氨基酸、無機鹽、表面活性劑、助懸劑或抗氧劑中的一種或多種；所述的防腐劑選自0.1％的疊氮鈉、Proclin-300或慶大霉素；校準品的濃度可以是高濃度單點參考校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成多個不同濃度的參考校準品，也可以直接制備成多個不同濃度的參考校準品，還可以是固定濃度的單點參考校準品，與生理鹽水共同繪制校準曲線。

9.根據權利要求8所述的試劑，其特征在于：所述穩定劑為含0.05％BSA的磷酸鹽緩沖液；所述校準品、低值質控物和高值質控物的濃度分別為40AU/mL、10AU/mL和30AU/mL。

10.一種利用權利要求1所述的試劑測定幽門螺桿菌抗體的方法，其特征在于：所述的方法如下：

所選樣本為人體血清，樣本與pH值為8.0±0.3的緩沖液預孵育3-5分鐘后，使樣本中的抗體結合位點充分暴露，加入幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑，繼續孵育3-5分鐘，人體血清中的幽門螺桿菌特異性抗體與幽門螺桿菌特異性抗原膠乳試劑中的幽門螺桿菌特異性抗原結合，形成不溶性的抗原-抗體復合物，產生一定的濁度，其濁度高低與檢測樣本中的特異性抗體濃度成正比，在規定波長下測定該不溶性抗原-抗體復合物的吸光度值，與已知濃度的幽門螺桿菌特異性抗體校準品進行比較，則可計算出樣本中幽門螺桿菌抗體的濃度。