[發明專利]一種重組腺病毒制劑的制備方法

無效

• 申請號: 201110219379.1
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102911967A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 沈麗麗
• 申請（專利權）人: 天津澤世德生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種重組腺病毒制劑的制備方法，特別是涉及一種重組腺病毒制劑的制備方法。

背景技術

腺病毒因其對人致病性小且不誘導癌變，宿主細胞廣，繁殖滴度高，裝載容量大，而成為近年來病毒載體研究熱點。但是即便是含有穩定劑的液體重組腺病毒制劑對溫度也較為敏感，給運輸、保存帶來較大困難，這在很大程度上限制了其在臨床上的應用。到目前為止，尚未有能在4～8℃長期保存的凍干重組腺病毒制劑上市。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于解決現有重組腺病毒制劑的穩定性，提供一種安全、高效、穩定性好、有效期長的冷凍干燥重組腺病毒制劑。

一種重組腺病毒制劑的制備方法，包括重組腺病毒原液及冷凍干燥添加劑，所述冷凍干燥添加劑基本上由人血白蛋白和羥乙基淀粉組成。為了更好地維持和保護原液生物的活性，所述冷凍干燥添加劑中還含有海藻糖、甘氨酸、精氨酸。所述冷凍干燥添加劑各組分的重量體積比為：

所述的重組腺病毒原液與所述冷凍干燥添加劑的比例是重組腺病毒原液∶冷凍干燥添加劑＝1∶(0.8～1.2)。

一種生產重組腺病毒制劑的方法，包括以下步驟：

(1)配制添加劑按上述添加劑配方，稱取各組分，溶于600毫升蒸餾水中，加入20％人血白蛋白，過濾，115℃消毒40分鐘；

(2)將第(1)溶液，用10％無菌磷酸氫二鈉調節溶液的pH值至7.0±0.1，補加蒸餾水至1000毫升，混勻；

(3)配制凍干制劑液：將重組腺病毒按內含腺病毒量1.0×10¹²顆粒數/ml的濃度以1∶(0.8～1.2)加入到上述溶液(2)中，無菌過濾，注入西林瓶中，半加塞；

(4)預凍：將分裝好的凍干制劑液放入冷凍干燥工作箱內，預置降溫程序，分別在5℃、0℃、-6℃各平衡1小時，啟動快速凍結程序，將物料溫度降至-30℃～-40℃，維持3～5小時；

(5)真空干燥：啟動真空工作程序，待冷凍干燥器內相對壓力降至5Pa，預設升溫程序，以每次升溫15℃維持30分鐘，持續減壓升溫至0～35℃并維持3小時；

(6)全部加塞，壓封鋁蓋。

成品凍干制劑按《中華人民共和國藥典》三部所列方法檢定，合格。

用本發明配方及方法制備獲得的重組腺病毒凍干制劑，經感染性滴度檢測試驗證明，制劑保持了重組腺病毒原有活性；并經30個月的穩定性試驗證明穩定性良好。與現有技術相比，本發明工藝合理，安全性和穩定性好，有效期長，為采用重組腺病毒作為載體的基因治療的臨床實驗提供良好的應用前景。

實施例1、

保護劑配方：羥乙基淀粉5.1g，精氨酸0.8g，甘氨酸0.1g，人血白蛋白2.5ml，海藻糖1.2g????

制備：

按配方將各組分混合，加純水至100ml，再將重組腺病毒按內含腺病毒量1.0×10¹²顆粒數/ml的濃度以1∶0.8加入到上述保護劑中，混合均勻進行無菌過濾、灌裝，采用真空冷凍干燥法，將制劑放入冷凍干燥箱，待冷凍干燥器內相對壓力降至5Pa，預設升溫程序，以每次升溫15℃維持30分鐘，持續減壓升溫至0～35℃并維持3小時即制成冷凍干燥重組腺病毒制劑。

實施例2

保護劑配方：羥乙基淀粉10.3g，精氨酸1.2g，甘氨酸0.08g，人血白蛋白3.1ml，海藻糖3.4g

制備：

按配方將各組分混合，加純水至100ml，再將重組腺病毒按內含腺病毒量1.0×10¹²顆粒數/ml的濃度以1∶0.8加入到上述保護劑中，混合均勻進行無菌過濾、灌裝，采用真空冷凍干燥法，將制劑放入冷凍干燥箱，待冷凍干燥器內相對壓力降至5Pa，預設升溫程序，以每次升溫15℃維持30分鐘，持續減壓升溫至0～35℃并維持3小時即制成冷凍干燥重組腺病毒制劑。

實施例3

保護劑配方：羥乙基淀粉19.8g，精氨酸1.7g，甘氨酸0.2g，人血白蛋白10ml，海藻糖5.9g

制備：

按配方將各組分混合，加純水至100ml，再將重組腺病毒按內含腺病毒量1.0×10¹²顆粒數/ml的濃度以1∶1.1加入到上述保護劑中，混合均勻進行灌裝，采用真空冷凍干燥法，將制劑放入冷凍干燥箱，待冷凍干燥器內相對壓力降至5Pa，預設升溫程序，以每次升溫15℃維持30分鐘，持續減壓升溫至0～35℃并維持3小時即制成冷凍干燥重組腺病毒制劑。